人脂肪源性间充质干细胞对乳腺癌转移的影响(2)
1.4 hAD-MSC的成骨和脂肪分化
1.4.1 成骨分化 调整hAD-MSC细胞浓度为5×104/mL，接种于培养板中，37℃ 5%CO2培养。24 h后，弃去原培养基，加入成骨诱导培养基(含谷氨酰胺、抗坏血酸、磷酸甘油、地塞米松)，分化培养2周后，固定细胞，茜素红(Alizarin red)染色鉴定。
1.4.2 脂肪分化 细胞准备同上述步骤。弃去hAD-MSC原培养基后，加入脂肪诱导培基A(含IBMX、吲哚美辛、地塞米松)；3 d后，换为脂肪诱导培基B(不含IBMX、吲哚美辛、地塞米松)；24 h后，再换成培基A。如此进行培基A和B的轮换，3个循环后完成诱导。最后培基B培养1周。固定细胞，油红O进行染色鉴定[7]。
1.5 hAD-MSC与肿瘤细胞系共培养
取对数生长期的MDA-MB-231(细胞浓度为2×105/mL)，加入到Transwell小室上层，每孔500 μL。常规培养hAD-MSC后，调整细胞浓度为2×105/mL，1.5 mL/孔，加入到小室下方 ......
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1.4.1 成骨分化 调整hAD-MSC细胞浓度为5×104/mL，接种于培养板中，37℃ 5%CO2培养。24 h后，弃去原培养基，加入成骨诱导培养基(含谷氨酰胺、抗坏血酸、磷酸甘油、地塞米松)，分化培养2周后，固定细胞，茜素红(Alizarin red)染色鉴定。
1.4.2 脂肪分化 细胞准备同上述步骤。弃去hAD-MSC原培养基后，加入脂肪诱导培基A(含IBMX、吲哚美辛、地塞米松)；3 d后，换为脂肪诱导培基B(不含IBMX、吲哚美辛、地塞米松)；24 h后，再换成培基A。如此进行培基A和B的轮换，3个循环后完成诱导。最后培基B培养1周。固定细胞，油红O进行染色鉴定[7]。
1.5 hAD-MSC与肿瘤细胞系共培养
取对数生长期的MDA-MB-231(细胞浓度为2×105/mL)，加入到Transwell小室上层，每孔500 μL。常规培养hAD-MSC后，调整细胞浓度为2×105/mL，1.5 mL/孔，加入到小室下方 ......
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