颈部不良应力对大鼠脊髓组织诱导型一氧化氮合酶表达影响的实验研究(2)
1.5.4 多聚合酶链(PCR)反应 按照2×Es Taq MasterMix产品说明书进行PCR反应,采用20 μL反应体系:2×Es Taq MasterMix 10 μL,上游引物1 μL,下游引物1 μL,cDNA 2 μL,双蒸水6 μL。反应步骤为:95°C孵育10 min,95°C孵育30 s,58°C孵育30 s,72℃延伸30 s,扩增35个循环,扩增完成后72°C孵育10 min;4°C保存。
1.5.5 琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像 制备2%浓度的琼脂糖凝胶(含溴化乙锭),将PCR产物和DNA Marker直接上样至琼脂糖凝胶中,120 V稳压电泳40 min后用BIO-RAD凝胶成像系统拍照,并用Image J软件进行灰度值测定。
1.6 NOS活性检测
严格按照试剂盒所提供试剂及操作方法进行。
1.7 统计学方法
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析 ......
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1.5.5 琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像 制备2%浓度的琼脂糖凝胶(含溴化乙锭),将PCR产物和DNA Marker直接上样至琼脂糖凝胶中,120 V稳压电泳40 min后用BIO-RAD凝胶成像系统拍照,并用Image J软件进行灰度值测定。
1.6 NOS活性检测
严格按照试剂盒所提供试剂及操作方法进行。
1.7 统计学方法
采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析 ......
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