温度、冻存液体积和操作时间对小鼠卵子Cryotop玻璃化冻融复苏率的影响(2)

http://www.100md.com 2016年9月25日 《中国医药导报》2016年第27期

     1 对象与方法

    1.1 对象

    1.1.1 实验动物 6周龄雌性昆明系小白鼠(体重20～25 g)，购自浙江中医药大学实验动物中心(动物合格证号：SYXK(浙)2013-0184)。

    1.1.2 药物与试剂 尿促性腺激素(HMG)与绒毛膜促性腺激素(HCG)均购自丽珠制药厂；透明质酸酶(hyaluronidas)及配子处理液G-GAMETE和G-IVF购自Vitrolife公司，二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、Dulbecco磷酸盐缓冲液(DPBS)以及蔗糖均购自Sigma公司；人血清白蛋白(HSA)以及石蜡油购自Sage公司。

    1.1.3 耗材与设备 四孔皿购自NUNC公司，60 mm培养皿及巴斯德管购自Falcon公司，装载工具Cryotop购自KITAZATO公司。超净工作台为丹麦IVFtech，解剖显微镜为日本OLYMPUS，培养箱为美国THEMRO，液氮罐为美国MVE。

    1.2 实验方法

    1.2.1 玻璃化冷冻解冻液的制备 冷冻液分为浓度由低到高的4个梯度：预平衡液(95% DPBS+5% HSA)；冷冻液Ⅰ(85% DPBS+5% DMSO+5% EG+5% HSA)；冷冻液Ⅱ(75% DPBS+10% DMSO+10% EG+5% HSA)；冷冻液Ⅲ(25% DPBS+20% DMSO+20% EG+30% 蔗糖+5%HSA) ......