1.4 qRT-PCR引物设计、检测软骨Ⅱ型胶原表达

    采用Primer 3.0设计Real Time PCR引物，引物序列经NCBI nBlast比对无非特异性扩增，用于qRT-PCR实验。该实验目的基因Ⅱ型胶原(ID100009005)引物序列(5' to 3')：Forward TGTGAACTGGTAGATCTGGT；Reverse AAGAAGTGGAATAAGTGGGCT。分别收集空白对照组与实验组细胞，将软骨细胞培养21 d后，提取软骨细胞总RNA，再用随机引物，逆转录酶转录为cDNA，然后以此cDNA第1链为模板，进行qRT-PCR扩增。

    1.5 GAG含量测定

    使用DMB染色法试剂盒检测细胞内GAG含量，使用24孔培养板培养细胞。首先测定吸光值：细胞裂解液裂解细胞，加入DMB显色剂，于525 nm波长处比色，测定吸光值；制作标准曲线：硫酸软骨素作标准溶液，加入DMB显色剂，测定吸光值，做出标准曲线[7]。两组曲线相互对比，求出GAG浓度。

    1.6 统计学方法

    采用SPSS 19.0统计软件分析 ......