1.7 Western blot检测磷酸化JNK 蛋白含量

    各组取组织或细胞，加入适量裂解液，裂解30 min，超声粉碎仪充分裂解细胞后，4℃ 12 000 r/min离心15 min，吸取上清，于-80℃保存。BCA法测定蛋白浓度。电泳采用10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶，恒压80 V 30 min，改120 V至溴酚蓝跑到凝胶底部。PVDF膜转膜，100 V恒流电转90 min，后3%BSA封闭1 h，洗膜后加p-JNK抗体(CST，1∶1000)，4℃孵育过夜，次日加入辣根过氧化物酶标记的二抗(Santa Cruz，1∶5000)，室温孵育2 h，TBST洗膜3次，化学发光底物ECL显色，BioRad化学发光成像系统进行显影。

    1.8 PASMCs细胞增殖能力检测

    将肺动脉平滑肌细胞(1×103个/孔)接种于96孔培养板。待细胞长至60%的融合度，弃原细胞培养液，饥饿处理24 h。分别及联合加入R1(50 mg/ml)和JNK抑制剂SP600125(40 nmol/L)，药物处理5 d后，每孔加入10 μL CCK8，37℃继续培养2 h ......