1.2.3 CCL20、CCL22、CCL27、CCR受体及CCL配体的检测分析

    采用ELISA的方法对CCL20、CCL22、CCL27在进行了检测；采用免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察成骨细胞表达CCL20、CCL22、CCL27的细胞形态。

    具体方法：①提取缺氧条件下的脊柱结核初发患者和复发患者的病变部位骨组织；②从骨组织中分离提取出成骨细胞并进行培养，3 d后取出并进行初次漂洗固定；③再次漂洗后滴加血清液并进行孵育，并分别滴加CCL20、CCL22、CCL27抗体并进行过夜(温度进行控制)；④再次漂洗，并滴加标记的免疫荧光二抗进行避光孵育，1 h后漂洗；⑤封片后置于激光共聚焦显微镜下，在波长488 nm的激发下进行比较观察；⑥使用Image-Pro plus软件分别对初发组和复发组的骨细胞CCL20、CCL22、CCL27进行扫描测定。

    检测脊柱结核患者初发组和复发组病骨细胞表面表达的CCR4细胞比例，以及分别加入α-CCL20、α-CCL22及α-CCL27后Th17细胞的趋化性表现。

    1.3 统计学方法

    采用统计软件SPSS 20.0对数据进行分析 ......