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编号:13229719
间充质干细胞协同BMP—2蛋白对造血干细胞增殖的影响(2)
http://www.100md.com 2018年4月25日 《中国医药导报》 2018年第12期
     1.2 方法

    1.2.1 间充质干细胞的培养和鉴定

    取年龄20~45岁健康正常人髂骨骨髓液(经医院伦理委员会批准及取得供者知情同意),与完全培养基按体积比为1∶4混合后于37℃、5%CO2孵箱中培养(完全培养基成分为89%LD-DMEM+10%胎牛血清+1%青-链霉素)。3 d换液1次,细胞融合达80%用0.25%胰蛋白酶消化1∶2传代,传至第三代(P3)备用,流式检测MSC表面抗原CD105、CD34-ECD及CD45。

    1.2.2 CD34+细胞的分选及纯度鉴定

    用Ficoll分选骨髓液中单个核细胞,根据miniMACS免疫磁性吸附柱分离装置,用CD34+细胞选择试剂盒按照其说明进行CD34+细胞的分离。流式检测所分选细胞的纯度。

    1.2.3 共培养

    实验分四组,HSC组:HSC单独培养,HSC+BMP2组:HSC添加BMP-2蛋白,HSC+MSC组:HSC种于Transwell上室、MSC种于下室 ......
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