1.3 环状RNA芯片实验操作流程

    实验组和对照组细胞培养至70%～80%融合度时，用TRIzol提取总RNA，经RNase R处理，去除线性RNA，富集circRNA，然后用随机引物对circRNA进行扩增并转录为荧光cRNA。cRNA纯化后在circRNA芯片上65℃杂交17 h。杂交后的芯片洗片后，应用Agilent Scanner G2505C扫描。

    1.4 数据采集与分析

    将芯片扫描图片导入Agilent Feature Extraction软件提取原始数据，应用R软件包进行标准化和分析，两组样本间差异表达的circRNA通过变化倍数进行筛选。应用预测软件TargetScan和miRanda，对于每个差异倍数大于1.5倍的circRNA预测5个高匹配值的miRNA。

    1.5 统计学方法

    采用Rv.3.3统计学软件进行数据分析，以标准化处理后数据为基础，两组间比较采用t检验 ......