1.2 方法

    1.2.1 标本采集 清晨采集受试者空腹外周血4 mL于枸橼酸钠抗凝管内，3000 r/min离心10 min(离心半径80 mm)，分离血浆置于-80℃冰箱保存备检。

    1.2.2 miR-135a和miR-146a的检测 400 μL患者血浆用RNA提取液(Qiagen公司，USA，批号：157037 881)提取总miRNA，逆转录试剂盒(Qiagen公司，USA，批号：160029569)以25℃ 10 min，50℃ 30 min，85℃ 5 min为条件逆转录为cDNA。7500型实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪(ABI公司，USA)进行扩增。miR-135a上游引物5′-GGGTAGAGTTTGTGTGTTG-CC-3′，下游引物：5′-TCTTCTTCCACCTCAGCCAC-3′;miR-146a上游引物：5′-CCGCCGTGAGAACTGAAT-TCCA-3′，下游引物：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;内参GAPDH上游引物：5′-GCACCGTCAAGGCTGAG-AAC-3′ ......