肿瘤转移蛋白Ezrin在口腔鳞状细胞癌中的表达(1)
【摘要】目的：检测Ezrin在口腔鳞状细胞癌(OSCC)、癌旁组织和口腔正常组织中的表达，探讨其在OSCC的发生发展过程中的作用及其与肿瘤淋巴结转移的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测未接受放疗和化疗的OSCC患者的手术切除标本50例、癌旁组织标本15例及口腔正常组织标本15例，用鼠抗人Ezrin单克隆抗体以及SP超敏试剂盒进行染色，采用半定量积分法判断结果，进行统计学分析，得出结论。结果：1)在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中，Ezrin表达分别为26.67%、53.34%、78.00%，其差异具有统计学意义(P<0.05)。2)Ezrin在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中表达逐渐增高，其在癌旁组织和正常组织、OSCC和癌旁组织、OSCC和正常组织之间的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。3)Ezrin的表达与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.05)，与细胞分化程度无关(P>0.05)。结论：1)Ezrin在OSCC的发生发展过程中可能起着重要作用。2)检测OSCC组织中Ezrin的表达水平可能有助于对OSCC是否具有淋巴结转移潜能进行预测。3)OSCC中Ezrin的表达与肿瘤淋巴结转移有关、与组织病理学分级无关。
【关键词】口腔鳞状细胞癌；Ezrin；肿瘤转移蛋白；免疫组织化学
【中图分类号】R782
【文献标识码】A
口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcino-ma，OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤，其导致的死亡率为口腔癌之首，危害极大，具有极高的研究价值。世界公认转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因，大约90%的恶性肿瘤患者死于肿瘤转移。近年来，Ezrin被发现与许多肿瘤发生、发展及预后相关。目前国外文献少有关于Ezrin在OSCC中表达的研究报道。中国学者对Ezrin的研究主要集中在骨肉瘤、横纹肌瘤等罕见的肿瘤，以及妇科肿瘤、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、乳腺癌等常见肿瘤中的表达。本研究旨在通过检测Ezrin在OSCC中的表达，初步探讨其在OSCC发生发展中的生物学意义。
1 材料和方法
1.1研究对象
选择2008年10月-2011年10月就诊于德阳市口腔医院口腔颌面外科的50例OSCC患者的手术切除标本。50例患者中男性32例，女性18例，年龄25～74岁。50例患者均无其他恶性肿瘤或严重内科疾病，术前均未行放、化疗。OSCC发生部位：颊部3例，唇部5例，舌部18例，口底17例，牙龈6例，咽旁1例。50例患者中伴有颈淋巴结转移者为36例。手术切除标本术后病理诊断为鳞状细胞癌，按世界卫生组织OSCC组织分型标准分高、中、低分化3级，其中高分化13例，中、低分化共37例。50例手术标本中选用15例在体外立即取癌旁组织(肿瘤临床边界周围1cm左右，肉眼观察大体正常的组织)标本并立即投入固定液中固定。口腔正常组织标本取自唇裂修补术切除的唇部组织及口腔良性病变周围的组织，共15例。标本的处理同前。
1.2主要实验试剂
鼠抗人Ezrin单克隆抗体、免疫组织化学超敏试剂盒Ultra SensitiveTMSP、即用型二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)；即用型抗体稀释液(Sigma公司，美国)。
1.3免疫组织化学染色
应用免疫组织化学SP法对50例OSCC组织标本、15例癌旁组织标本、15例正常口腔组织标本进行Ezrin特异性染色。石蜡切片脱蜡至水，0.01mol·L-1枸橼酸缓冲液常规水浴加热修复抗原，用过氧化物酶阻断溶液来阻断内源性过氧化物酶的活性，每张切片加正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，除去血清，加鼠抗人Ezrin免疫组织化学单克隆抗体。室温下孵育60min，加生物素标记的羊抗鼠/兔IgG，室温下孵育10min，加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，室温下孵育10min。磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solu-tion，PBS)冲洗3次，每次3min，DAB显色，自来水冲洗，苏木精复染，PBS冲洗返蓝，梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。染色过程中设阳性和阴性对照，阳性对照用已知阳性切片，阴性对照用PBS代替一抗。
1.4免疫组织化学结果判定
Ezrin以细胞膜或者细胞质中出现明显的黄色或棕色颗粒为阳性染色；采用半定量积分法判断结果，每张切片随机选5个高倍视野观察，计数100个细胞，阳性细胞数≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；阳性强度：黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者积分相乘：0～1分为阴性，2～6分为阳性，8～12分为强阳性。阳性和强阳性作为表达阳性组计算其阳性率。
1.5统计学分析
采用SPSS 14.0统计软件包进行X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1Ezrin在各组织中的表达
Ezrin定位于细胞的胞膜或细胞质，若胞膜或细胞质中出现了明显的黄色或棕黄色颗粒则为阳性细胞(图1)。
15例正常口腔组织标本中，Ezrin表达阳性率为26.67%；15例癌旁组织标本中，Ezrin表达阳性率为53.34%，其中强阳性表达者占20.00%；50例OSCC组织标本中，Ezrin表达阳性率为78.00%，其中强阳性表达者占44.00%，阳性表达者占34.00%。本研究显示：OSCC组织中，Ezrin的表达高于正常口腔组织和癌旁组织，三组间差异有统计学意义(P<0.05)，表明Ezrin在OSCC的发生发展过程中起一定的作用。, 百拇医药(孙鹏 成方静 江涛 梁尚争)
【关键词】口腔鳞状细胞癌；Ezrin；肿瘤转移蛋白；免疫组织化学
【中图分类号】R782
【文献标识码】A
口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcino-ma，OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤，其导致的死亡率为口腔癌之首，危害极大，具有极高的研究价值。世界公认转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因，大约90%的恶性肿瘤患者死于肿瘤转移。近年来，Ezrin被发现与许多肿瘤发生、发展及预后相关。目前国外文献少有关于Ezrin在OSCC中表达的研究报道。中国学者对Ezrin的研究主要集中在骨肉瘤、横纹肌瘤等罕见的肿瘤，以及妇科肿瘤、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、乳腺癌等常见肿瘤中的表达。本研究旨在通过检测Ezrin在OSCC中的表达，初步探讨其在OSCC发生发展中的生物学意义。
1 材料和方法
1.1研究对象
选择2008年10月-2011年10月就诊于德阳市口腔医院口腔颌面外科的50例OSCC患者的手术切除标本。50例患者中男性32例，女性18例，年龄25～74岁。50例患者均无其他恶性肿瘤或严重内科疾病，术前均未行放、化疗。OSCC发生部位：颊部3例，唇部5例，舌部18例，口底17例，牙龈6例，咽旁1例。50例患者中伴有颈淋巴结转移者为36例。手术切除标本术后病理诊断为鳞状细胞癌，按世界卫生组织OSCC组织分型标准分高、中、低分化3级，其中高分化13例，中、低分化共37例。50例手术标本中选用15例在体外立即取癌旁组织(肿瘤临床边界周围1cm左右，肉眼观察大体正常的组织)标本并立即投入固定液中固定。口腔正常组织标本取自唇裂修补术切除的唇部组织及口腔良性病变周围的组织，共15例。标本的处理同前。
1.2主要实验试剂
鼠抗人Ezrin单克隆抗体、免疫组织化学超敏试剂盒Ultra SensitiveTMSP、即用型二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)；即用型抗体稀释液(Sigma公司，美国)。
1.3免疫组织化学染色
应用免疫组织化学SP法对50例OSCC组织标本、15例癌旁组织标本、15例正常口腔组织标本进行Ezrin特异性染色。石蜡切片脱蜡至水，0.01mol·L-1枸橼酸缓冲液常规水浴加热修复抗原，用过氧化物酶阻断溶液来阻断内源性过氧化物酶的活性，每张切片加正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，除去血清，加鼠抗人Ezrin免疫组织化学单克隆抗体。室温下孵育60min，加生物素标记的羊抗鼠/兔IgG，室温下孵育10min，加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，室温下孵育10min。磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solu-tion，PBS)冲洗3次，每次3min，DAB显色，自来水冲洗，苏木精复染，PBS冲洗返蓝，梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。染色过程中设阳性和阴性对照，阳性对照用已知阳性切片，阴性对照用PBS代替一抗。
1.4免疫组织化学结果判定
Ezrin以细胞膜或者细胞质中出现明显的黄色或棕色颗粒为阳性染色；采用半定量积分法判断结果，每张切片随机选5个高倍视野观察，计数100个细胞，阳性细胞数≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；阳性强度：黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者积分相乘：0～1分为阴性，2～6分为阳性，8～12分为强阳性。阳性和强阳性作为表达阳性组计算其阳性率。
1.5统计学分析
采用SPSS 14.0统计软件包进行X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1Ezrin在各组织中的表达
Ezrin定位于细胞的胞膜或细胞质，若胞膜或细胞质中出现了明显的黄色或棕黄色颗粒则为阳性细胞(图1)。
15例正常口腔组织标本中，Ezrin表达阳性率为26.67%；15例癌旁组织标本中，Ezrin表达阳性率为53.34%，其中强阳性表达者占20.00%；50例OSCC组织标本中，Ezrin表达阳性率为78.00%，其中强阳性表达者占44.00%，阳性表达者占34.00%。本研究显示：OSCC组织中，Ezrin的表达高于正常口腔组织和癌旁组织，三组间差异有统计学意义(P<0.05)，表明Ezrin在OSCC的发生发展过程中起一定的作用。, 百拇医药(孙鹏 成方静 江涛 梁尚争)