周小垚 顾翔风 柳伯安 孔繁平 赵 蓉 张继英 余奇文 张冬青

    医用小型猪骨加工工艺与免疫原性的检测与分析※

    周小垚1顾翔风1柳伯安1孔繁平1赵 蓉2张继英2余奇文2张冬青2

    目的制备医用小型猪骨的浸出性异种蛋白，检测和分析其皮质和松质混合骨(以下简称混合骨)与单纯皮质骨(以下简称皮质骨)浸出性异种蛋白刺激和诱导人淋巴细胞增殖的应答反应。方法应用化学和物理学方法制备获得医用小型猪混合骨与皮质骨粉，以定量RPMI-1640搅拌和浸泡4℃ 72h后高速离心获取上清液且进行蛋白定量检测；随即应用CCK-8方法检测和分析混合骨与皮质骨浸出性异种蛋白刺激和诱导人外周血淋巴细胞增殖的差异性；以及人外周血淋巴细胞增殖培养上清中四种细胞因子表达的异同。结果CCK-8实验结果表明：CCK-8实验未见混合骨与皮质骨浸出性异种蛋白具有刺激和诱导人淋巴细胞增殖的应答反应的统计学差异；而应用ELISA酶联免疫吸附实验对人淋巴细胞培养上清中IFN-r、IL-1、IL-10和TNF-a的检测结果提示：与对照组相比，经工艺处理后小型猪骨组的四种炎症相关因子均较处理前组具有统计学的显著性差异(P<0.05)，而皮质骨组较混合骨组其炎症相关因子的表达同样具有统计学差异。结论本实验结果提示，应用已建立的小型猪骨加工工艺可有效处理和抑制异种蛋白对人淋巴细胞增殖的刺激和诱导作用，表明小型猪混合骨与皮质骨其异种蛋白的抗原性存在一定的差异；本小型猪骨加工工艺和免疫原性的检测和分析系统的建立为医用性异种骨的使用提供了理论与实验数据的参考。

    小型猪；异种蛋白；抗原；CCK-8；酶联免疫吸附

    近年来，小型猪作为医用材料特别是异种移植的供体具有许多优点，由于猪在心血管系统、消化系统、皮肤系统、骨骼发育、营养代谢等方面与人类具有较大的相似性，既能解决人源器官严重不足、提供源源不断的供体器官、组织、细胞，也可克服灵长类动物异种带来的伦理、烈性病毒传染病等问题，一直是人类异种移植的首选供体和研究开发的热点。其中，猪骨的研究作为人类骨的移植和替代更是迅猛发展[1-2]。本研究组多年来一直从事猪骨的生物学材料、力学、免疫学和病毒学的研究。特别是建立和建全了一套研制猪骨医用材料的生产和制备工艺；并且从生物力学、微生物与免疫学诸方面对生产和制备的猪骨材料进行了系统的检测与分析[3-5]；本文报告的是应用CCK-8和ELISA实验方法对本加工工艺制备的混合骨与皮质骨的免疫原性的差异性进行了初步的检测与分析。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与材料 ......