DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立
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周虎传 杨劲 曾益军 位全芳 何凤田 赵谦 李劲 刘洋 李杰 第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所
【摘要】目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polt)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆。结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系。结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础。
【关键词】 DNA聚合酶iota HEK-细胞 DNA损伤 DNA修复
【基金】国家自然科学基金(30770460) 中国人民解放军医药卫生科研基金(06H026)
【分类号】R346
DNA polL是最近几年发现的DNA聚合酶Y家族中的一员.DNA聚合酶Y家族是一类跨损伤修复酶，在人类至少包括四类:ReVI，poIK，pol，，polL.它们都能以损伤的n以为模板进行复制即跨损伤修复。Pol，和Pol‘由RAD30基因编码，Pol，由RAD30A基因编码，pol”在跨损伤修复中具有较高的
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摘要目的：将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota，Pol咨)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1 转入HEK-293 细胞，建立DNA 聚合酶iota 在HEK-293细胞中的高表达体系，为进一步研究DNA聚合酶在DNA 损伤修复中的生物学功能奠定了基础。方法：用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1 转入HEK-293 细胞，通过G418 筛选抗性克隆，用一步法提取细胞总RNA，采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆。结果：通过G418 筛选筛选出了具有G418 抗性的克隆，通过RT-PCR技术检测出高表达DNA 聚合酶iota 的HEK-293 细胞系。结论：建立了高表达DNA 聚合酶iota的HEK-293 细胞系，为进一步研究DNA 聚合酶在DNA 损伤修复中的生物学功能奠定了基础。
关键词：DNA聚合酶iota，HEK-293 细胞，DNA 损伤，DNA 修复。
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