人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达及pcDNA3.1-FHIT的构建与转染
基因表达,真核表达质粒,性表达,重组质粒,真核表达载体,分析鉴定
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刘飞 黄照权 李楠 夏海鸣 黄培林 东南大学医学院病理学系;右江民族医学院病理学系;
【摘要】目的:检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达状况及构建pcDNA3.1-FHIT真核表达载体。方法:RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达,构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT,通过酶切法、PCR扩增法和DNA序列分析鉴定重组质粒后,用脂质体转染至FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,经G418筛选后RT-PCR鉴定。结果:FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达,在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。FHIT基因cDNA正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并成功转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45。结论:FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。成功构建pcDNA3.1-FHIT,并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,使其FHIT基因阳性表达。
【关键词】 FHIT基因 胃癌细胞系 基因表达 构建 转染 真核表达质粒 性表达 重组质粒 真核表达载体 分析鉴定
【基金】右江民族医学院科研基金资助。
【分类号】R735.2
别青脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad，FHIT)纂因是O- hta(l!等于19%年从上皮癌细胞系3p14.2区域克隆出的一个候选抑癌基因，是第一个将染色体脆性位点与肿瘤相关联的抑癌基因一该基因编码147个氨基酸组成的蛋自质，关于其功能，Ohta等I”发现它是几联组氨酸(H，stl
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摘要目的：检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达状况及构建pcDNA3.1-FHIT 真核表达载体。方法：RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT 基因mRNA的表达，构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT，通过酶切法、PCR 扩增法和DNA 序列分析鉴定重组质粒后，用脂质体转染至FHIT 基因mRNA 阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，经G418 筛选后RT-PCR鉴定。结果：FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823 中呈阳性表达，在MGC-803、MKN-45 细胞系中呈阴性表达。FHIT 基因cDNA 正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1 中，并成功转染FHIT 基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45。结论：FHIT 基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。成功构建pcDNA3.1-FHIT，并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，使其FHIT基因阳性表达。
关键词：FHIT 基因；胃癌；基因表达；构建；转染
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