人VDAC2融合蛋白质粒构建及原核表达研究
 |
| 第1页 |
参见附件(2540KB，4页)。
董国法 丁道芳 王燕菲 广州医学院生物化学教研室;
【摘要】目的:构建人VDAC2融合蛋白原核表达质粒并进行原核表达研究。方法:运用RT-PCR技术在培养的人HepG2.2.15细胞中钓取到目的基因VDAC2,连接至T载体上进行克隆,获得大量目的基因与原核表达载体pTrc-CKS、pMBP-P连接,构建重组融合蛋白表达质粒,转入大肠杆菌中DH5α,BL21(DE3)LySs中,IPTG诱导蛋白原核表达,表达产物经SDS-PAGE检测,分析蛋白表达情况。结果:成功构建了重组载体pTrc-CKS-VDAC2和pMBP-P-VDAC2,并在原核大肠杆菌中实现了重组融合蛋白的超量表达。结论:构建的两个人VDAC2的融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中均得到超量表达。为进一步研究VDAC2蛋白奠定了基础。
【关键词】 VDAC 原核表达 pTrc-CKS pMBP-P
【基金】国家自然科学基金(30270305) 广东省自然科学基金(020733)
【分类号】Q78
前言V D A C(V oltage-D ependentA nion Channel,电压依赖性阴离子通道)是最早发现于线粒体外膜的一种含量丰富的蛋白质[1],对V D A C的进一步研究表明V D A C不仅存在于线粒体内外膜,而且存在于人类淋巴细胞及上皮细胞的质膜上。在不同物种中发现几种V D A C亚型,在酵母中
------
摘要 目的：构建人VDAC2融合蛋白原核表达质粒并进行原核表达研究。方法：运用RT-PCR技术在培养的人HepG2.2.15细胞中钓取到目的基因VDAC2，连接至T载体上进行克隆，获得大量目的基因与原核表达载体pTrc-CKS、pMBP-P连接，构建重组融合蛋白表达质粒，转入大肠杆茵中DH5α，BL21(DE3)LySs中，IPTG诱导蛋白原核表达，表达产物经SDS-PAGE检测。分析蛋白表达情况。结果：成功构建了重组栽体pTrc-CKS-VDAC2和pMBP-P-VDAC2，并在原核大肠杆菌中实现了重组融合蛋白的超量表达。结论：构建的两个人VDAC2的融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中均得到超量表达。为进一步研究VDAC2蛋白奠定了基础。
关键词：VDAC2；原核表达；pTrc-CKS；pMBP-P；
中图分类号：Q512 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)10-1805-04
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2540KB，4页)。