含14-3-3蛋白抑制肽R18重组腺病毒制备及其在心肌细胞中的表达
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廖文强 庞燕 于长安 李耿 温见燕 张翼冠 李晓辉 中日友好医院全国中西医结合心血管病中心;第三军医大学药学院;
【摘要】目的:构建并鉴定含14-3-3蛋白抑制肽R18的重组腺病毒,为研究14-3-3蛋白的功能提供基础工具。方法:用同源重组方法构建含14-3-3蛋白抑制肽R18的复制缺陷型腺病毒载体(AdR18),并加以鉴定、扩增,以获得高滴度AdR18病毒液,体外感染乳大鼠心肌细胞,检测目的基因表达。结果:将构建的重组腺病毒载体AdR18感染乳大鼠心肌细胞并表达48h后,蛋白印迹结果显示AdR18感染组有明显R18的表达,对照组无表达。结论:腺病毒载体可高效率导入外源基因在心肌细胞中高表达。
【关键词】 重组腺病毒 --蛋白 心肌细胞
【基金】国家自然基金资助项目(No30470465)
【分类号】R346
前言将外源基因导入到细胞或者组织器官中高表达是现在分子生物学的重要的技术之一。导入外源基因的到真核细胞表达的常规简便的方法是用转染试剂(磷酸钙转染试剂或者脂质体试剂)或者用电转染方法转染真核表达质粒。尽管这些方法简便，但对某些细胞特别是非增殖的细胞如原代
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摘要 目的：构建并鉴定含14-3-3蛋白抑制肽R18的重组腺病毒，为研究14-30蛋白的功能提供基础工具。方法：用同源重组方法构建含14-3-3蛋白抑制肽R18的复制缺陷型腺病毒载体(AdR18)，并加以鉴定、扩增，以获得高滴度AdR18病毒液，体外感染乳大鼠心肌细胞，检测目的基因表达。结果：将构建的重组腺病毒载体AdR18感染乳大鼠心肌细胞并表达48h后，蛋白印迹结果显示AdR18感染组有明显R18的表达，对照组无表达。结论：腺病毒载体可高效率导入外源基因在心肌细胞中高表达。
关键词：重组腺病毒；14-3-3蛋白；心肌细胞
中图分类号：R-332，R322.61 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)11-2013-03
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