胚胎干细胞在体外模拟心肌生长环境中向心肌分化
细胞分化,抗坏血酸,心脏微环境,心肌细胞
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欧东波 陈瑞 郑强荪 郭菁菁 郭万刚 刘雄涛 第四军医大学唐都医院心内科;第四军医大学唐都医院整形烧伤科;
【摘要】目的:探讨获得大量成熟同质有功能的心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的方法。方法:胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)经悬滴培养法形成拟胚体(embryoid bodies,EBs),将EBs用抗坏血酸处理后与天然心肌细胞共培养诱导ESCs的分化,采用免疫组化、流式细胞技术、RT-PCR、超微分析等方法分析分化细胞(ESC-derived CMs,ESCMs)的结构和功能。结果:共培养组,常规组和对照组中有(90.1±3.40)%,(29.6±6.03)%和(20.1±3.82)%的EBs表现节律性收缩,差异有统计学意义(P0.05)。在体外模拟的心脏微环境中,不但跳动EBs的数目明显增加,且单个跳动EBs中含有功能CMs的百分比也明显增加。兴奋收缩的自律性能维持更长时间,在后期分化得到的有功能ESCMs在细胞形态上接近于天然的心肌细胞。结论:心脏微环境是促使ESCs特定地分化为CMs的关键因素,抗坏血酸处理和共培养诱导策略可使ESCs定向分化为CMs。
【关键词】 胚胎干细胞 细胞分化 抗坏血酸 心脏微环境 心肌细胞
【分类号】R329
前言胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)是全能干细胞,在体外培养条件下可以分化出各种组织细胞,其中包括心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)[1,2]。分化出的CMs能够表达心脏的特异性标志物并拥有如同心脏控制其起搏功能的离子通道[3,4]。由于促使ESCs有效分化的分子机制和信
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摘要 目的：探讨获得大量成熟同质有功能的心肌细胞(cardiomyocyces，CMs)的方法。方法：胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)经悬滴培养法形成拟胚体(embryoid bodies，EBs)，将EBs用抗坏血酸处理后与天然心肌细胞共培养诱导ESCs的分化，采用免疫组化、流式细胞技术、RT-PCR、超微分析等方法分析分化细胞(ESC-derived CMs，ESCMs)的结构和功能。结果：共培养组，常规组和对照组中有(90.1±3.40)%，(29.6±6.03)%和(20.1±3.82)%的EBs表现节律性收缩，差异有统计学意义(P<0.05)。在体外模拟的心脏微环境中，不但跳动EBs的数目明显增加，且单个跳动EBs中含有功能CMs的百分比也明显增加。兴奋收缩的自律性能维持更长时间，在后期分化得到的有功能ESCMs在细胞形态上接近于天然的心肌细胞。结论：心脏微环境是促使ESCs特定地分化为CMs的关键因素，抗坏血酸处理和共培养诱导策略可使ESCs定向分化为CMs。
关键词：胚胎干细胞；细胞分化；抗坏血酸；心脏微环境；心肌细胞
中图分类号：Q813，Q132.7 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)04-622-05
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