抗菌肽PekⅡ基因在大肠杆菌中的融合表达及初步纯化
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朱杰 陈素华 宋珊珊 董先智 安徽农业大学生命科学学院;中国科学院生物物理研究所;中国海洋大学海洋生命学院;
【摘要】目的:研究抗菌肽PekⅡ基因在大肠杆菌中的融合表达并初步纯化。方法:根据大肠杆菌密码子的偏好性,人工设计并合成2段核苷酸序列,退火获得PekⅡ基因;将此基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建成抗菌肽基因PekⅡ融合表达载体pGEX-PekⅡ,转化至大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导。取超声破碎后的上清经Glutathione SepharoseTM 4亲和层析得到纯化融合蛋白。结果:PCR和测序表明已获得正确PekⅡ编码基因,SDS-PAGE显示29kD处有特异性的蛋白条带出现,纯化得到的GST-PekⅡ经MALDI-TOF MS分析得出其相对分子质量为29553.03。结论:抗菌肽PekⅡ基因在大肠杆菌中的融合表达获得成功,初步纯化得到纯品。
【关键词】 抗菌肽 大肠杆菌 融合蛋白 表达
【分类号】Q78
前言抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs),又叫抗微生物肽(Antimicrobial peptide)、抗生素肽(Antibiotics peptide),是生物体经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽,分子量为2000-7000,广泛存在于细菌、真菌、两栖类、昆虫、高等动植物中。通常意义上的抗菌肽是指由基
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摘要 目的：研究抗菌肽PekⅡ基因在大肠杆菌中的融合表达并初步纯化。方法：根据大肠杆菌密码子的偏好性，人工设计并合成2段核苷酸序列，退火获得PekⅡ基因；将此基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中，构建成抗菌肽基因PekⅡ融合表达载体pGEX-PekⅡ，转化至大肠杆菌BL21中，用IPTG进行诱导。取超声破碎后的上清经Glutathione SepharoseTM4亲和层析得到纯化融合蛋白。结果：PCR和测序表明已获得正确PekⅡ编码基因，SDS-PAGE显示29kD处有特异性的蛋白条带出现，纯化得到的GST-PekⅡ经MALDI-TQF MS分析得出其相对分子质量为29553.03。结论：抗菌肽PekⅡ基因在大肠杆菌中的融合表达获得成功，初步纯化得到纯品。
关键词：抗菌肽；大肠杆菌；融合蛋白；表达
中图分类号：R78，R916 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)04-676-03
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