携带靶向性可调控自杀基因的重组相关腺病毒载体的构建及其活性检测
基因治疗,腺相关病毒,VEGF启动子,HSVtk基因,Tet-On
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李子博 曾赵军 孙开胜 罗洁 长沙医学院医学检验系;中南大学生物科学与技术学院分子生物学研究中心;
【摘要】目的:构建携带受Tet-On以及VEGF启动子双调控自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒载体,研究其在乳腺癌细胞MCF-7中的可调控表达。方法:用PCR方法扩增VEGF启动子,将其插入pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On中形成重组载体pAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On质粒。进行病毒包装后得到了rAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒。用重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺HBL-100细胞,用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞和HBL-100细胞的杀伤作用以及HSVtk基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果:在rAAV+Dox+GCV组,GCV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组,rAAV+Dox组以及HBL-100组,并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论:成功构建了携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒载体,该病毒载体能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7,并能联合GCV治疗,抑制肿瘤细胞生长,而且具有靶向性。
【关键词】 基因治疗 腺相关病毒 VEGF启动子 HSVtk基因 Tet-On
【基金】湖南省教育厅基金资助项目(L07C151)
【分类号】Q784
前言自杀基因治疗是一种常用于肿瘤治疗的研究策略。单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)能在细胞内将无毒副作用的药物前药丙氧鸟苷(ganciclovior,GCV)转化为毒性产物,诱导靶细胞产生“自杀”效应,从而导致肿瘤细胞的死亡[1]。在基因治疗中,调节目的基因在宿主细胞中的表达以及提高
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摘要目的：构建携带受Tet-On以及VEGF启动子双调控自杀基因HSVtk的重组腺相关病毒栽体，研究其在乳腺癌细胞MCF-7中的可调控表达。方法：用PCR方法扩增VEGF启动子，将其插入pAAV/TRE/HSVtk/Tet-On中形成重组栽体pAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On质粒。进行病毒包装后得到了rAAV/VEGF/TRE/HSVtk/Tet-On重组腺相关病毒。用重组腺相关病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺HBL-100细胞，用MTT法及RT-PCR检测在Dox诱导下，GCV对rAAV感染的MCF-7细胞和HBL-100细胞的杀伤作用以及HSVtk基因在MCF-7细胞内的表达情况。结果：在rAAV+Dox+GCV组，GcV对rAAV感染的MCF-7细胞的杀伤作用明显高于rAAV+Dox组，rAAV+Dox组以及HBL-100组，并且RT-PCR结果显示经Dox诱导HSVtk表达较明显。结论：成功构建了携带双调控自杀基因的重组腺相关病毒栽体。该病毒栽体能有效的感染乳腺癌细胞MCF-7，并能联合GCV治疗，抑制肿瘤细胞生长。而且具有靶向性。
关键词：基因治疗；腺相关病毒；VEGF启动子；HSVtk基因；TenOn
中图分类号：Q784 文献标识码：A 文章编号：1673—6273(2009)08—1424—04
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