人PRKAG2全长基因的体外拼接及TA克隆载体的构建
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张必利 郑兴 徐荣良 吴弘 秦永文 第二军医大学附属长海医院心内科;
【摘要】目的:应用体外基因拼接及TA克隆技术构建含PRKAG2基因的载体。方法:通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC068598),其在N端缺失了44个氨基酸,根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203),设计搭桥引物及序列扩增引物,通过PCR搭桥方法,合成完整全序列的PRKAG2基因,并将其克隆到TA载体,将得到的阳性克隆测序鉴定。结果:拼接出全长1759bp的PRKAG2基因,目的基因连接到载体后测序与设计的PRKAG2基因完全一致。结论:成功的构建了全长人PRKAG2基因的TA克隆,为进一步研究PRKAG2基因的功能提供了模板。
【关键词】 PRKAG基因 基因拼接 TA克隆载体
【分类号】Q78
体外基因拼接是一种基于PCR技术获得外源基因的常用分子生物学实验方法,Stemmer等[1]最早报道了这种实验方法,主要指通过PCR反应得到多条寡核苷酸,再通过特定的PCR反应条件从而获得外源基因。PRKAG2基因与人类心脏发育息息相关,研究表明其突变后可以导致心脏多种异常表现,与
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摘要 目的：应用体外基因拼接及TA克隆技术构建合PRKAG2基因的载体。方法：通过商业途径购得PRKAG2基因的一个转录变体cDNA质粒(GenBank登记号BC 068598)，其在N端缺失了44个氨基酸，根据已知的PRKAG2基因序列(GenBank登记号NM_016203)，设计搭桥引物及序列扩增引物，通过PCR搭桥方法，合成完整全序列的PRKAG2基因，并将其克隆到1-A载体，将得到的阳性克隆测序鉴定。结果：拼接出全长1759bp的PRKAG2基因，目的基因连接到载体后测序与设计的PRKAG2基因完全一致。结论：成功的构建了全长笔PRKAG2基因的TA克隆，为进一步研究PRKAG2基因的功能提供了模板。
关键词：PRKAG2基因；基因拼接；TA克隆载体
中图分类号：Q78，Q785 文献标识码：A 文章编号：1673—6273(2009)08—1465—04
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