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编号:11776268
酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽的研究
http://www.100md.com 2009年4月15日 孙平楠 张学成 陈云松 臧晓南
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    孙平楠 张学成 陈云松 臧晓南 汕头大学医学院;中国海洋大学生命学院;

    【摘要】目的:实现酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素。方法:人工合成鲑鱼降钙素(Salmoncacitonin,sCT)编码基因,克隆到表面展示载体M-pYD1上。用NocI酶切重组质粒M-pYD1-sCT和空白质粒M-pYD1,回收sCT和V5表达框片段后分别以LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株,分别得到重组酵母yAGA2-sCT和yAGA2-V5。两种重组酵母分别经半乳糖诱导表达后,采用FITC荧光标记酵母表面展示的sCT和V5多肽,分别用荧光显微镜和流式细胞仪进行定性和定量分析。结果:诱导12h后,荧光显微镜下清晰观测到了工程菌表面有重组sCT,流式细胞分析结果表明10000个细胞中65.2%的yAGA2-sCT菌株表达了外源sCT,52.4%的yAGA2-V5菌株表达V5。结论:利用酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽获得了成功,为口服型鲑鱼降钙素的研发奠定了基础。

    【关键词】 酿酒酵母 鲑鱼降钙素 表面展示

    【基金】广东省自然科学基金(No.8451503102001823)

    【分类号】R91

    鲑鱼降钙素(Salmon cacitonin,sCT)是由32个氨基酸组成的一种多肽类药物,其活性是人降钙素的20~40倍[1]。鲑鱼降钙素能够抑制破骨细胞活性减少骨钙流失,其安全性高于双磷酸盐等破骨细胞抑制剂,而且还能够作用于神经中枢,产生镇痛的特殊效果[2],因此在欧美国家应用普遍。目前,
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     摘要 目的:实现酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素。方法:人工合成鲑鱼降钙素(Salmon cacitonin,sCT)编码基因,克隆到表面展示载体M-pYD1上。用Noc I酶切重组质粒M_pYD1-sCT和空白质粒M-pYD1,回收sCT和V5表达框片段后分别以LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株,分别得到重组酵母yAGA2-sCT和yAGA2-V5。两种重组酵母分别经半乳糖诱导表达后,采用FITC荧光标记酵母表面展示的sCT和V5多肽,分别用荧光显微镜和流式细胞仪进行定性和定量分析。结果:诱导12h后,荧光显微镜下清晰观测到了工程菌表面有重组sCT,流式细胞分析结果表明10000个细胞中65.2%的yAGA2-sCT菌株表达了外源sCT,52.4%的yAGA2-V5菌株表达V5。结论:利用酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽获得了成功,为口服型鲑鱼降钙素的研发奠定了基础。

    关键词:酿酒酵母;鲑鱼降钙素;表面展示

    中图分类号:R394.8 文献标识码:A 文章编号:1673—6273(2009)08—1472—03

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