Skp2RNA干扰对人结肠癌HcT116细胞p27表达及对5-氟尿嘧啶敏感性影响的研究
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解方为 欧阳学农 彭永海 张霞 王文武 南京军区福州总医院肿瘤科;
【摘要】目的:细胞S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein,Skp2)作为泛素化降解过程中的一种F-box蛋白,在泛素化降解中起着特异性的底物识别和关键性的速率限制作用。依赖Skp2的泛素化降解途径参与p27、p21等众多细胞周期调控因子的降解,进而通过影响G1-S检测点而调控细胞周期。本研究探讨靶向干扰人结肠癌HCT116细胞中Skp2基因对细胞p27表达的影响及细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的变化。方法:将已合成好的特异性的Skp2RNA干扰载体转染人结肠癌HCT116细胞,G418稳定筛选后,通过RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞内p27mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对5-FU敏感性的变化。结果:在转染干扰载体后,HCT116细胞内的p27mRNA表达无明显变化,蛋白水平却明显上升。MTT显示HCT116细胞对5-FU敏感性较其他组显著提高,IC50值明显下降(P0.05)。结论:Skp2基因的RNA干扰能够上调结肠癌细胞内源性p27蛋白的表达,并提高5-FU对癌细胞的杀伤作用,为大肠癌的基因治疗提供了新的思路。
【关键词】 肠肿瘤 RNAi 药物敏感性 Skp p
【分类号】R735.35
细胞周期的运行受多种因素所调控。参与细胞周期调控的主要因子有:周期蛋白(cyclin),周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinase,CDK),周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI)。CDK与cyclin-CDK复合物正性催化细胞周期过程,而CKI通过与cyclin,CDK或cyclin-CDK复合物结合抑制并阻断细
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摘要目的：细胞S期激酶相关蛋白2(s-phase kinase associatedproteIn，skp2)作为泛素化降解过程中的一种F-box蛋白，在泛素化降解中起着特异性的底物识别和关键性的速率限制作用。依赖skp2的泛素化降解途径参与p27、p21等众多细胞周期调控因子的降解，进而通过影响G1-S检测点而调控细胞周期。本研究探讨靶向干扰人结肠癌HCT116细胞中Skp2基因对细胞p27表达的影响及细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的变化。方法：将已合成好的特异性的Skp2RNA干扰载体转染人结肠癌HCT116细胞，G418稳定筛选后，通过RT-PCR，和Western印迹法分别检测细胞内p27mRNA和蛋白的表达情况，MTT法检测细胞对5-FU敏感性的变化。结果：在转染干扰载体后，HCT116细胞内的p27mRNA表达无明显变化，蛋白水平却明显上升。MTT显示HCT116细胞对5-FU敏感性较其他组显著提高，IC50值明显下降(P<0.05)。结论：Skp2基因的RNA干扰能够上调结肠癌细胞内源性p27蛋白的表达，并提高5-FU对癌细胞的杀伤作用，为大肠癌的基因治疗提供了新的思路。
关键词：肠肿瘤；RNAi；药物敏感性；Skp2；p27；
中图分类号：R735.34 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)12-2237-03
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