MMP-7基因真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达与鉴定
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张江霖 万炜 湖南省妇幼保健院;南华大学人体解剖学教研室;
【摘要】目的:构建MMP-7基因真核重组质粒,检测并鉴定MMP-7在人宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法:提取宫颈癌组织总RNA,通过基因克隆构建MMP-7基因真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/MMP-7,酶切、PCR及基因测序鉴定,用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染人宫颈癌Hela细胞,RT-PCR检测外源基因的表达、间接免疫荧光法检测对表达产物进行鉴定。结果:成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1(+)/MMP-7并转染了人宫颈癌Hela细胞,通过RT-PCR可以检测到MMP-7 mRNA在Hela细胞中的表达,经间接免疫荧光反应可检测到明显的阳性反应,而转染空载体组表达阴性。结论:构建的重组质粒pcDNA3.1(+)/MMP-7能在Hela细胞中表达,为该蛋白在人子宫癌后续的功能研究奠定了基础。
【关键词】 MMP- 重组质粒 Hela细胞 基因表达
【基金】湖南省教育厅科研基金资助项目(03C415,04B057) 湖南省自然基金资助(04JJY093)
【分类号】R737.33
前言近年来,宫颈癌的发病率逐渐增高,由于发病隐匿,发现时多已经出现转移,因此其病死率特别高。基质金属蛋白酶(ma-trix metalloproteinases,MMPs)属于锌肽酶超家族,目前已确认的成员有24个,根据特异性作用底物不同,可分为胶原酶、明胶酶、基质溶解酶和膜型金属蛋白酶4大类[1-
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摘要目的：构建MMP-7基因真核重组质粒，检测并鉴定MMP-7在人宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法：提取宫颈癌组织总RNA，通过基因克隆构建MMP-7基因真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/MMlP-7，酶切、PCR及基因测序鉴定，用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染人宫颈癌Hela细胞，RT-PCR检测外源基因的表达、间接免疫荧光法检测对表达产物进行鉴定。结果：成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1(+)/MMP-7并转染了人宫颈癌Hela细胞，通过RT-PCR可以检测到MMP-7mRNA在Hela细胞中的表达，经间接免疫荧光反应可检测到明显的阳性反应，而转染空载体组表达阴性。结论：构建的重组质粒pcDNA3.1(+)/MMP-7能在Hela细胞中表达，为该蛋白在人子宫癌后续的功能研究奠定了基础。
关键词：MMP-7；重组质粒；Hela细胞；基因表达
中图分类号：R-332，R322.61 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)13-2535-03
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