平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体对ATP酶活性的调节作用
平滑肌收缩,肌球蛋白轻链激酶(MLCK),肌球蛋白Mg+-ATP酶活性
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崔颖 谢策 吕广艳 王辉 赵莹 魏晓晴 曲淑贤 曹晶萍 高颖 辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室;大连医科大学生化教研室;
【摘要】目的:探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制。方法:利用编码MLCK全长的pColdI表达载体对其ATP结合位点进行定点突变,获得无激酶活性的MLCK突变体;应用Glycerol-PAGE鉴定肌球蛋白磷酸化水平;应用孔雀绿方法检测重组MLCK对肌球蛋白ATP酶活性的影响。结果:MLCK/△ATP(突变型)失去磷酸化肌球蛋白轻链的激酶活性;重组MLCK(野生型)和MLCK/△ATP(突变型)均可以在非钙条件下激活非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性,抑制磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性,而且激活与抑制作用均随着MLCK浓度的增加而增大,但二者对肌球蛋白的ATP酶活性的作用没有显著差异(P0.05)。结论:平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体具有激活非磷酸化肌球蛋白ATP酶活性的作用。
【关键词】 平滑肌收缩 肌球蛋白轻链激酶(MLCK) 肌球蛋白 肌球蛋白Mg+-ATP酶活性
【基金】国家自然科学基金资助项目(30470394)
【分类号】Q55
前言平滑肌在体内分布十分广泛,对维持许多生理功能起着重要作用,其收缩机制非常复杂。肌球蛋白轻链激酶(myosinlight chain kinase,MLCK)在平滑肌收缩过程中起着关键调控的作用。研究表明,MLCK的分子结构包括位于激酶中心部位的激酶活性结构域、N末端的肌动蛋白结合域、C末
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摘要目的：探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响，进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制。方法：利用编码MLCK全长的pColdⅠ表达载体对其ATP结合位点进行定点突变，获得无激酶活性的MLCK突变体；应用Ghrcerol-PAGE鉴定肌球蛋白磷酸化水平；应用孔雀绿方法检测重组MLCK对肌球蛋白ATP酶活性的影响。结果：MLCK/△ATP(突变型)失去磷酸化肌球蛋白轻链的激酶活性；重组MLCK(野生型)和MLCK/△ATP(突变型)均可以在非钙条件下激活非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性，抑制磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性，而且激活与抑制作用均随着MLCK浓度的增加而增大，但二者对肌球蛋白的ATP酶活性的作用没有显著差异(P>0.05)。结论：平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体具有激活非磷酸化肌球蛋白ATP酶活性的作用。
关键词：平滑肌收缩；肌球蛋白轻链激酶(MLCK)；肌球蛋白；肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性
中图分类号：Q71 文章标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)16-3034-04
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