毕赤酵母菌高效表达乙肝表面抗原的研究
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杜云英 郭秋华 何小维 华南理工大学轻工与食品学院;
【摘要】目的:筛选高效表达HBsAg的毕赤酵母菌,制备目的蛋白。方法:从已确诊的乙肝病人血清中提取DNA,PCR扩增HBVS基因,将其分别克隆入毕赤酵母胞内表达载体pPICZA中。构建重组质粒pPICZA-S和pPICZA-SH,经SacI线性化后,LiCl化学法转化入酵母菌株GS115、X-33、KM71H和SMD1168。结果:诱导表达后的GS115工程菌单位体积的培养基所得的抗原含量最高,诱导培养基中加入0.1%酪蛋氨基酸后,可抑制目的蛋白的水解,有利于目的蛋白的表达,粗略估算表达量为15.3mg/L,最佳收获时间为72h。结论:经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,所得产物为乙肝表面抗原S蛋白。
【关键词】 乙肝表面抗原 毕赤酵母菌 表达
【基金】广东省产学研结合项目(2006D90504011) 广东省科技公关项目(2006B40101013)资助
【分类号】R512.62
前言全世界约有20亿人感染了乙型肝炎病毒,其中约有3.5亿人患有慢性感染[1,2]。估计每年有60万人死于急性或慢性乙型肝炎[3,4]。HBsAb是机体感染HBV后,HBsAg刺激免疫系统产生的保护性抗体,而HBsAg主要是从乙型肝炎病毒感染者血液中获得。近年来随着乙肝治疗水平的提高和计划
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前言
全世界约有20亿人感染了乙型肝炎病毒，其中约有3.5亿人患有慢性感染。估计每年有60万人死于急性或慢性乙型肝炎。HBsAb是机体感染HBV后，HBsAg刺激免疫系统产生的保护性抗体，而HBsAg主要是从乙型肝炎病毒感染者血液中获得。近年来随着乙肝治疗水平的提高和计划免疫的推行，高效价血源HBsAg的获取越来越困难。因此，借助分子生物学和基因工程技术的迅速发展，选用合适的表达系统，得到高产量HBsAg的表达水平势在必行。
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