脂质体介导的人甲状腺过氧化物酶基因转染肺癌A549细胞及其蛋白表达
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杜琎 严煜 张裕东 王晓谭 江苏省中西医结合医院心胸外科;南通大学附属医院心胸外科;
【摘要】目的:利用基因转染技术,研究以脂质体Lipofectamine2000为载体介导的人甲状腺过氧化物酶(TPO)基因体外转染肺癌细胞,检测感染细胞内TPO蛋白的表达,为放射性碘治疗肺癌提供理论和实验依据。方法:将获得的含TPO基因的质粒pcDAN3.1-hTPO进行扩增、纯化,并经酶切鉴定和DNA测序。将肺癌A549细胞在体外复苏与培养并分为两组:转染质粒pcDAN3.1-hTPO的为实验组,转染空质粒pcDAN3.1的为对照组。以脂质体Lipofectamine2000为载体,介导TPO基因转染肺癌细胞。采用WesternBlot免疫印迹法和免疫组化法分别检测肺癌细胞中TPO蛋白的表达。结果:①酶切鉴定和DNA测序结果表明质粒pc-DAN3.1-hTPO中插入的基因为hTPO基因,其片段大小和方向正确。②体外培养的肺癌细胞活力及数量正常,细胞活力为96%,细胞生长密度为1×106/ml,满足实验要求。③质粒转染A549细胞后,WesternBlot免疫印迹法显示:在实验组中,肺癌A549细胞有TPO蛋白的表达,而在对照组中无表达。④免疫组化染色结果显示:在实验组的肺癌A549细胞中,TPO蛋白表达阳性且主要分布于细胞膜上,阳性表达率可达75%,而在对照组中TPO蛋白表达阴性,两组比较差异有显著性(P=0.000)。结论:①获得的hTPO基因片段的核苷酸序列与GeneBank报道完全一致。②在脂质体Lipofectamine2000的介导下,TPO基因能够有效地转染肺癌细胞。③转染人甲状腺过氧化物酶基因的肺癌细胞能够在体外成功地表达TPO蛋白。
【关键词】 甲状腺过氧化物酶 基因转染 肺癌细胞 脂质体 放射性碘治疗
【分类号】R734.2
前言目前131I治疗甲亢和分化型甲状腺癌、131I-MIBG治疗肾上腺素能肿瘤都取得了较为肯定的疗效,但这些治疗仅能对能选择性摄取放射性核素或其标记药物的恶性肿瘤有效。这是因为甲状腺滤泡细胞表达钠/碘同向转运体(NIS),其逆浓度将细胞外的131I摄取至细胞内,使病灶内浓聚大量的
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前言
目前I治疗甲亢和分化型甲状腺癌、I-MIBG治疗肾上腺素能肿瘤都取得了较为肯定的疗效，但这些治疗仅能对能选择性摄取放射陸核素或其标记药物的恶性肿瘤有效。
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