IGF2基因组印迹系统人重组腺病毒载体的构建与鉴定
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张丽荣 渠利利 王波 何帮顺 潘玉琴 徐勇飞 朱蝉 王书奎 南京医科大学附属南京第一医院中心实验室;南京师范大学生命科学学院;
【摘要】目的:构建携带IGF2印迹系统的腺病毒载体,并验证其在肿瘤细胞及正常细胞中的功效,为IGF2印迹在肿瘤靶向治疗中的应用提供理论基础。方法:将人源的IGF2印迹系统启动子H19、增强子enhancer及甲基化区域CTCF克隆至穿梭质粒pDC-312中构建IGF2基因印迹系统,从pDC-315-EGFP质粒中扩增出EGFP片段插入到构建好的IGF2印迹系统中,然后与腺病毒骨架Ad5通过脂质体Lipofectamine 2000介导共转染HEK293细胞,包装成有感染能力的腺病毒Ad-H19-CTCF-enhancer-EGFP,命名为Ad-EGFP;构建好的腺病毒分别感染IGF2基因印记保持的细胞MCF-7和GES-1及IGF2基因印迹丢失的细胞HRT-18,荧光显微镜下观察EGFP在三种细胞中表达的差异。结果:转染腺病毒载体的HEK293细胞表达EGFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,EGFP在HRT-18细胞中有大量表达,在MCF-7和GES-1细胞中不表达或仅有少量表达。结论:成功构建了携带IGF2基因印迹系统的腺病毒载体,证明其在IGF2基因印迹丢失的肿瘤细胞中特异性的表达,在正常细胞及IGF2基因印迹保持细胞中不表达,为IGF2基因印迹系统应用于肿瘤细胞的靶向治疗提供了理论基础。
【关键词】 基因印迹 IGF 靶向治疗
【基金】国家自然科学基金资助项目(30873022)
【分类号】Q78
前言肿瘤的发生发展是一个多途径的复杂过程,随着大批学者对肿瘤发生的分子机理不断深入的探索研究,基因治疗逐渐成为攻克肿瘤新的发展方向。基因组印迹(genomic imprinting)是指来自于父源及母源的遗传基因在子代中选择性表达的表观遗传学改变。胰岛素样生长因子2(insulin-li
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前言
肿瘤的发生发展是一个多途径的复杂过程，随着大批学者对肿瘤发生的分子机理不断深入的探索研究，基因治疗逐渐成为攻克肿瘤新的发展方向。基因组印迹(genomic imprinting)是指来自于父源及母源的遗传基因在子代中选择性表达的表观遗传学改变。胰岛素样生长因子2(insulin-Iikegrowthfactor2，IGF2)是一个只有父源等位基因表达的基因组印迹保持基因，近年来许多研究者发现无论是肿瘤组织还是肿瘤细胞株中均存在IGF2父源及母源等位基因同时表达的现象，即基因组印迹丢失(loss ofimprinting，LOI)现象，Hu等研究了14种肿瘤细胞株(肺癌、直肠癌、乳腺癌、肝癌及前列腺癌)，发现其中有8种存在IGF2 LOI的现象，而正常细胞中不存在IGF2 LOI。鉴于肿瘤细胞中IGF2印迹丢失现象的特异性，应用IGF2印迹丢失的原理靶向治疗肿瘤成为可能。本研究通过构建携带IGF2基因印迹系统的腺病毒感染IGF2印迹不同的细胞，观察其在这些细胞中的表达，探讨IGF2基因印迹系统应用在肿瘤靶向治疗中的可行性，为进一步研究打下理论基础。
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