PDX-1表达质粒的构建及表达
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夏华强 刘律君 徐小明 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所 人类干细胞国家工程研究中心;
【摘要】目的:为进一步研究PDX-1基因的功能打下基础。方法:从人的胰腺cDNA中PCR扩增PDX-1基因的阅读框架,构建质粒pAAV-PDX-1。用pAAV-PDX-1转染293T细胞48小时后,用RT-PCR和Western Blot方法检测293T细胞中mRNA和蛋白水平PDX-1的表达。结果:转染了pAAV-PDX-1的293T细胞中有PDX-1的表达,而在转染质粒pAAV-MCS和未转染的293T细胞中均没有检测到PDX-1的表达。结论:构建的pAAV-PDX-1质粒在mRNA和蛋白水平都能表达PDX-1。
【关键词】 质粒构建 pAAV-PDX- T细胞
【基金】国家自然科学基金(30800650) 国家973项目(2007CB947900) 国家863项目(2006AA02A102)资助
【分类号】R346
前言胰腺-十二指肠同源框1(pancreatic duodenalhomeobox-1,PDX-1)蛋白大多分布于胰岛内分泌胰岛素的β细胞和分泌生长抑素的δ细胞中,它与胰腺的发育密切相关。PDX-1作为胰岛素启动子-1(IPF-1)、生长抑素活化因子-1(STF-1)和胰岛-十二指肠同源域蛋白(IDX-1)而存在,被认为是
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1 材料与方法
1.1 材料
pAAV-MCS载体由本实验室提供，293T细胞购自ATCC，各种限制性内切酶、LATaqDNA聚合酶、DnaseI购自NEB公司；Trizol购自hvitrogcn公司；dN7P(10mM)、逆转录试剂盒购自Fermentas公司；低糖DMEM购自G1beco公司；小牛血清购自杭州四季青公司；梭华-SofastTM购自厦门太阳马公司。anti-PDX—I抗体、Goat anti.rabblt IgG和Goat anti-mouselgG购自Abcom公司；鼠抗人antl-B-actin抗体购自SantaCluZ公司。
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