转录因子NF-YA真核表达载体的构建及转染HeLa细胞中的表达
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戴灿 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所 人类干细胞国家工程中心;
【摘要】目的:构建pAAV-NF-YA真核表达载体并转染子宫颈癌HeLa细胞,检测NF-YA的表达水平。方法:抽提人类胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞的总RNA,RT-PCR获得NF-YA基因的cDNA,克隆至pAAV-MCS载体中,经限制性酶切和测序鉴定后,重组质粒pAAV-NF-YA转染HeLa细胞,Western Blot检测NF-YA的表达。结果:成功构建了NF-YA的真核表达载体,转染HeLa细胞后NF-YA的表达水平有显著提高。结论:获得了有效的pAAV-NF-YA真核表达载体,为后续NF-Y的功能研究提供了便利。
【关键词】 NF-YA 真核表达载体 HeLa细胞
【基金】国家高技术研究发展计划(863项目)(2006AA02A102) 国家重点基础研究发展计划(973项目)(2007CB948103)
【分类号】R737.33
前言NF-Y(nuclear factor Y)是一个高度保守的转录因子,由A、B、C三个亚基组成。在NF-Y三聚体复合物中,B和C亚基先形成二聚体,然后再与A亚基结合。NF-Y与DNA的序列特异性结合是由A亚基决定的,细胞中的功能性NF-Y因子水平也受到A亚基浓度的调控,B和C亚基随之表达[1],因此NF-YA
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前言
NF-Y(nuclear factor Y)是一个高度保守的转录因子，由A、B、C三个亚基组成。在NF-Y三聚体复合物中，B和c亚基先形成二聚体，然后再与A亚基结合。NF-Y与DNA的序列特异性结合是由A亚基决定的，细胞中的功能性NF-Y因子水平也受到A亚基浓度的调控，B和c亚基随之表达，因此NF-YA是关键的调控亚基。人类NF-YA基因定位于6号染色体p21.3，包含10个外显子。基因转录后调控产生了大、小两个转录本，小转录本中外显子3被剪切掉而形成了29个氨基酸截短的NF-YAS蛋白。本文成功构建了NF-YA两个转录本的真核表达载体pAAV-NF-YAL和pAAV-NF-YAS，为后续转录因子NF-Y的功能研究提供了便利。
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