绿色荧光小鼠胚胎干细胞的分离与培养
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谭广云 谢万华 周焱 黄永业 宋红肖 李栋 宋娜 袁婷 段新平 逄大欣 欧阳红生 吉林大学农学部畜牧兽医学院;
【摘要】目的:建立绿色荧光小鼠胚胎干细胞系。方法:以ICR及GFP转基因小鼠为实验动物,冲取交配后3.5天小鼠GFP-/+囊胚,去透明带后进行完全培养,以13.5天鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为饲养层,并对细胞克隆用亚克隆的方法分离扩大培养。结果:获得了边缘清晰,表面平滑,结构致密,隆起生长的鸟巢状克隆,碱性磷酸酶染色呈强阳性,干细胞特异性的多能因子OCT4及Nanog表达呈阳性,且能稳定表达绿色荧光的雄性干细胞系。结论:本文为小鼠ES细胞系的建立提供了一种稳定而可靠的方法。
【关键词】 EGFP 胚胎干细胞 小鼠
【分类号】Q813
前言干细胞(stem cell)具有独特的无限制自我更新能力以及分化为各种组织的可塑能力,是细胞治疗,药物生产,组织修复等的有力工具,同时也是细胞核重编程,细胞分化过程等基础研究不可替代的模型。胚胎干细胞在对胚胎发育,基因调控,转基因动物的研究上都有重要的意义[1],而小鼠
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前言
干细胞(stem cell)具有独特的无限制自我更新能力以及分化为各种组织的可塑能力，是细胞治疗，药物生产，组织修复等的有力工具，同时也是细胞核重编程，细胞分化过程等基础研究不可替代的模型。胚胎干细胞在对胚胎发育，基因调控，转基因动物的研究上都有重要的意义，而小鼠胚胎干细胞(MES)作为目前除人之外的唯一一种在体外培养过程中可维持干细胞的未分化状态、正常二倍体核型及无限增殖能力，具有体内外分化能力和种系嵌合能力的细胞，其在生物学研究中的作用是不可替代的。在MES细胞中利用基因打靶技术已成为研究基因功能的常规技术，为动物医学模型的建立提供了极好的原材料，而到目前为止，从转基因的小鼠建立干细胞系鲜有报道，本文以GFP转基因雄鼠与ICR小鼠杂交建立了表达绿色荧光的ES细胞系，为进一步的研究提供条件。
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