大鼠低氧诱导因子-1α基因克隆和表达载体的构建
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张振 王君 吕苗苗 肖志彬 张玉明 高昌俊 孙绪德 第四军医大学唐都医院麻醉科;
【摘要】目的:对低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因进行克隆及载体构建,为进一步研究HIF-1基因转染骨髓基质细胞移植治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据。方法:制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,提取脊髓组织mRNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PR)合成HIF-1α cDNA,并对其进行PCR扩增,对PCR产物进行纯化及连接T载体、转化感受态和双酶切鉴定,并将HIF-lα克隆入pcDNA3.l载体。结果:PCR扩增的片段长度为2472bp与预期结果一致;利用BamHI和XbaI双酶切能够切出大小约2472bP的目的片段,与PCR产物片段大小相等,经测序证实无碱基改变。结论:成功克隆HIF-lα,并被构建到载体pcDNA3.l中,为进一步研究基因转染奠定了基础。
【关键词】 低氧诱导因子-α 脊髓缺血再灌注损伤 基因克隆 大鼠
【基金】全军“十一五”军队基金(2009专字第167号)
【分类号】Q78
前言脊髓缺血损伤(Spinal Cord Ischemia Injury,SCII)是由各种原因引起的脊髓外伤、脊髓压迫、胸腹主动脉外科手术中动脉的阻断、损伤或低灌注压造成的原发性损害。再灌注过程中可进一步加重神经元损害,引起再灌注损伤。研究发现低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是一种主要在缺氧
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前言
脊髓缺血损伤(spinal Cord Ischemia Injury，SCII)是由各种原因引起的脊髓外伤、脊髓压迫、胸腹主动脉外科手术中动脉的阻断、损伤或低灌注压造成的原发性损害。再灌注过程中可进一步加重神经元损害，引起再灌注损伤。
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