紫杉醇合成关键酶BAPT基因的克隆及原核表达
曼地亚红豆杉,-氨基--苯基丙酰转移酶基因
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张志建 郭佳玉 张鹏 徐盼盼 刘博 张燏 付春华 余龙江 华中科技大学生命科学与技术学院资源生物学与生物技术研究所;华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室;
【摘要】目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达。方法:首先提取曼地亚红豆杉细胞的总RNA,反转录获得其sscDNA,并以其为模板扩增BAPT酶的基因,然后将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a(+)-BAPT,并将重组质粒转入E.coliBL21宿主中诱导表达。结果:扩增获得1338bp的BAPT基因序列,成功构建了原核表达质粒pET32a(+)-BAPT,并在E.coliBL21中实现高效表达。结论:BAPT基因表达产物的分子量约为51kDa,与预期大小一致。该研究为进一步分析曼地亚红豆杉BAPT酶的酶学特性奠定了基础。
【关键词】 曼地亚红豆杉 紫杉醇 -氨基--苯基丙酰转移酶基因 原核表达
【基金】国家自然科学基金面上项目(NSFC20776058) 2006年教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0646)
【分类号】Q943.2
前言紫杉醇(Taxol)是从红豆杉属植物中分离得到的一种高效、低毒、广谱的天然抗癌药物[1],是目前最好的抗肿瘤药物之一。目前,紫杉醇主要依赖于从红豆杉植物中直接提取获得。但是,由于天然红豆杉资源稀缺且紫杉醇含量极低,使得紫杉醇药物来源十分困难,从而限制了紫杉醇的应用
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前言
紫杉醇(Taxol)是从红豆杉属植物中分离得到的一种高效、低毒、广谱的天然抗癌药物，是目前最好的抗肿瘤药物之一。目前，紫杉醇主要依赖于从红豆杉植物中直接提取获得。但是，由于天然红豆杉资源稀缺且紫杉醇含量极低，使得紫杉醇药物来源十分困难，从而限制了紫杉醇的应用。因此，只从天然红豆杉中提取紫杉醇远远不能满足人们对紫杉醇日益增长的需求。通过红豆杉细胞培养生产紫杉醇是解决紫杉醇药源紧缺问题的有效途径之一。然而，红豆杉细胞培养法目前尚存在产量不够高等问题，通过基因工程手段导人紫杉醇合成的关键酶基因，有望构建紫杉醇高产的转基因红豆杉细胞系。
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