HCV core 1b亚型和HA共表达重组腺病毒载体的构建与鉴定
 |
| 第1页 |
参见附件(2570KB，4页)。
蒋丽娜 李航 谷雨 叶菁 李青 第四军医大学基础部病理学与病理生理学教研室;
【摘要】目的:构建HCV core 1b亚型和HA共表达的腺病毒载体并予以鉴定。方法:合成HCV核心蛋白1b亚型的核苷酸,连接入pcmv5-HA质粒中。用XhoⅠ单酶切,后用Klenow酶补平,再用HindⅢ单酶切下HA-HCV core 1b片段,连入pShuttle-cmv穿梭质粒中,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-HA core 1b.将pShuttle-CMV-HA core 1b转化至含有AdEasy-1的BJ5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAd-HA-HCV core 1b并转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。用RT-PCR检测HA-HCVcore 1b的mRNA的表达水平,并用Western blot检测融合表达蛋白HA-HCV core 1b的表达水平。结果:穿梭质粒pShuttle-CMV-HA-HCV core 1b经PCR和测序证实构建成功。重组腺病毒载体经AD293细胞包装后,可观察到CPE现象。用获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞,经RT-PCR检测,在mRNA水平上有表达;经Western blot检测,HCV core 1b亚型腺病毒载体(Ad-HA-HCV core 1b)感染组与未感染腺病毒载体组及空白对照组相比,只有Ad-HA-HCV core 1b感染组有融合蛋白HA-HCVcore 1b的表达。结论:通过分子克隆体外重组技术,成功构建了HCV core 1b亚型和HA共表达的重组腺病毒载体Ad-HA-HCVcore 1b。为进一步研究丙型肝炎病毒1b亚型引起丙肝感染中胰岛素抵抗的作用机制提供了方法。
【关键词】 HCV core b亚型 重组腺病毒载体 分子克隆
【基金】国家自然科学基金81000171/H0316
【分类号】R512.63
前言目前认为丙型肝炎病毒(HCV)感染是一种与脂质代谢,氧化应激和线粒体功能相关的系统性疾病。有研究表明,HCV感染会增加糖尿病或胰岛素抵抗的风险[1]。基础研究,临床研究和流行病学研究证明丙型肝炎对胰岛素抵抗有独立的作用。特别是Moucari等人证实,丙肝病毒1型对胰岛素抵
------
前言
目前认为丙型肝炎病毒(HCV)感染是一种与脂质代谢，氧化应激和线粒体功能相关的系统性疾病。有研究表明，HCV感染会增加糖尿病或胰岛素抵抗的风险。
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2570KB，4页)。