马铃，张全，殷霄，李晓宇，赵立勋，岑山

    目前，艾滋病的防治工作主要依靠抗 HIV-1 药物，临床使用的抗 HIV 药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)，如 Zidovudine(AZT)、Lamivudine(3TC)、Emtricitabine(FTC)等，非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)，如 Efavirenz(EFV)、Nevirapine(NVP)、Delavirdine(DLV)等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir(RTV)、Saquinavir(SQV)、Indinavir(IDV)等。融合抑制剂主要有 Enfuvirtide(T20)。整合酶抑制剂主要有 Elvitegravir(GS- 9137)和Raltegravir(MK-0518)[1-2]。

    尽管目前临床上抗 HIV-1的药物已多达 20 余种，但由于HIV-1 高变异而导致的多重或交叉耐药性等问题，开发新作用机制的抗 HIV-1 药物仍然是当务之急[3]。在抗HIV-1 活性化合物筛选过程中，对化合物作用机制的快速判断，以及排除药物筛选过程中的脱靶现象，将减少药物研发过程中的盲目性，同时也能降低研究成本。因此，本研究针对这一问题，建立了一种对抗 HIV-1 活性化合物作用靶点的快速判断方法。

    HIV-1的基因组为约 9 kb的正义RNA，其两端是长末端重复序列(long terminal repeats，LTR)，含顺式调控序列，控制前病毒的表达，在LTR 有启动子和增强子并含有负调控区。两端 LTR 之间表达 gag，pol，env，tat，rev，vpu，vpr，vif和nef 9个主要蛋白。HIV 侵袭靶细胞的主要过程为：识别和黏附、膜融合、逆转录、整合、修饰和翻译、装配和释放。一般将整合以前归为早期事件，之后归为晚期事件[4](图 1)。

    本研究以荧光素酶作为报告基因，其活性代表病毒的感染性，并用抗 HIV-1 作用靶点明确的药物(EFV、3TC、MK-0518、SQV和T20)作为阳性对照，验证不同药物对病毒生活周期的影响，最终确立快速判断未知化合物抗HIV-1 活性作用靶点的方法，为后续的筛选及研究工作提供便利。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料 ......