孙晶，綦惠，陶剑锋，杰永生，陈磊，程晓光，孙磊

    ·论著·

    旋转反应器胶原支架的制备及复合软骨细胞修复骨软骨损伤的初步研究

    孙晶，綦惠，陶剑锋，杰永生，陈磊，程晓光，孙磊

    目的以胶原为原料开发一种小型胶原支架材料，尝试是否适合旋转反应器来复合软骨细胞，并探讨复合细胞后修复软骨损伤的效果。

    胶原； 支架(骨科)； 生物相容性材料；细胞培养技术

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2012, 7(4):257-262

    鉴于软骨细胞和软骨组织的特殊性，关节软骨的修复问题是当前临床面临的一大挑战，传统修复方法形成的新生组织主要是纤维软骨，不具有正常透明软骨的机械特性。应用组织工程学的方法进行软骨修复是目前的一大进步[1-5]。获取种子细胞(软骨细胞或某种干细胞)，将种子细胞接种到可降解的支架材料上，构建成细胞-材料复合物，用于软骨组织的缺损修复[4-6]。因此，支架材料的选择和制备是应用组织工程学方法修复软骨损伤的重要环节。

    胶原作为细胞生长的依附和支持物能诱导细胞增殖、分化和移行，与创伤愈合过程关系密切。胶原的水溶液经冷冻干燥后可制得胶原膜，可广泛用于皮肤创伤和烧伤的修复、牙周引导膜、皮肤缺陷、骨缺损的修复、神经及血管的修复、药物缓释系统、基因传递载体、整形美容、止血、伤口敷料等[7-10]。多孔胶原膜是组织工程常用的支架材料。由于软骨再生修复能力有限，本研究应用多孔胶原膜作为软骨修复的支架材料，采用旋转培养的体系，有利于细胞在培养过程中的物质交换，促进软骨细胞贴附以及后期软骨的修复。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1主要试剂 DMEM/F-12 培养基购自美国Hyclone 公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)购自韩国Biosharp 公司；胃蛋白酶、II 型胶原酶、胰蛋白酶是美国 Sigma 公司产品；乙酸、戊二醛等为国产分析纯试剂；透析袋和培养板分别来自生工生物工程(上海)股份有限公司和美国 Corning 公司。

    1.1.2仪器 细胞培养箱是美国 Thermal 公司的产品；倒置相差显微镜购自日本 Olympus 公司；低温高速离心机购自美国 Sigma 公司；真空冷冻干燥机是美国 Virtis 公司产品；酶标仪购自美国Bio-Rad 公司。

    1.1.3实验动物 SPF 级成年 SD 雄性大鼠，体重 250 ～ 300 g，由北京积水潭医院动物室提供，许可证号 SCXK(京)2011-0006；清洁级成年新西兰大白兔 ......