李原，刘文财，孙文龙，董悦生，阎浩林

    ·论著·

    蠕虫NADH-延胡索酸还原酶模型优化及沃特曼内酯F的活性评价

    李原，刘文财，孙文龙，董悦生，阎浩林

    目的优化蠕虫 NADH-延胡索酸还原酶及哺乳动物NADH 氧化酶的高通量筛选模型，评价沃特曼内酯 F 的活性及选择性。

    抗蠕虫药； 电子传递复合物 I； NADH 氧化酶； 沃特曼内酯 F

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2012, 7(4):276-280

    蠕虫和哺乳动物的呼吸能量代谢系统的差异是发现新的抗蠕虫药物的热点[1]。蠕虫线粒体呼吸链电子传递系统的 NADH-延胡索酸还原酶(NFRD，EC 1.3.1.6)，由 complex I 和 complex II组成[2]。该酶系将电子传递给complex I，并经过深红醌传递给complex II，同时催化延胡索酸生成琥珀酸。而哺乳动物不含该酶系，相对应的酶系为NADH-氧化酶(EC 1.6.99.3)，由 complex I、III 和IV 组成。目前已经发现的 NFRD 抑制剂有nafuredin[3]，ukulactone A、B[4]等，但对蠕虫 NFRD和哺乳动物 NADH-氧化酶模型的条件优化未见报道。沃特曼内酯是本课题组从邬氏黄丝曲霉(Talaromyces. wortmannii)F01Z0195 中分离得到一类新化合物[5-6]，与 ukulactone 类化合物结构相近，本研究旨在优化蠕虫 NFRD 评价模型并评价沃特曼内酯 F 的选择性抑制活性。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1试剂 猪蛔虫和猪心均采自大连肉联厂；沃特曼内酯 F 本实验室自制；NaH2PO4、葡萄糖购自天津大茂化学试剂厂；NaCl、Na2HPO4·12H2O 购自国药集团化学试剂有限公司；Tris-HCl、EDTA-2Na、NADH·2Na 购自中国北京Solarbio 公司；蔗糖购自天津市福晨化学试剂厂。

    1.1.2仪器 全波长扫描荧光酶标仪 Varioscan Flash IX71/IX51 为美国 Thermo Fisher Scientific公司产品；离心机 SORVALL 为德国 Biofuge Stratos 产品；榨汁机 MSL-2008A 为成都每时乐电器有限公司产品；PB-10 型 pH 计为德国 Sartotius公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1线粒体提取 首先线粒体提取均在冰浴中进行 ......