邢咏梅，李红莲，郭顺星

    活性氧(ROS)存在于所有真核生物正常细胞代谢过程中，现已明确低浓度非致死性的活性氧可以作为细胞-信号通路的调节分子，调节各种生理过程[1]。作为真核细胞型微生物的真菌，其分化发育也与活性氧的产生密切相关。Egan 等[2]通过研究证实，真菌细胞中的活性氧与细胞的分化直接相关。植物病原真菌由菌丝形成菌核的机制一直倍受研究者们的关注。Georgiou[3]首先提出了真菌菌核的形成及分化与氧化应激高度相关，并且发现了Sclerotium rolfsii 菌核的形成过程伴随着高度的脂质过氧化反应的发生。在随后的研究中，植物病原真菌菌核的形成被认为是由氧化应激触发形成的[4]。生物体内产生的活性氧包括：过氧化氢(H2O2)、单线态氧()、羟自由基(·OH)、超氧自由基(·)等。药用真菌猪苓菌丝形成菌核过程中是否伴随 ROS 的变化以及抗氧化剂对猪苓菌丝形成菌核的影响值得探讨。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验菌株 本实验所用猪苓采自山西古县北平镇党家山村，由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员分离鉴定，保存于麦麸琼脂培养基中。

    1.1.2 试剂 麦芽糖、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、维生素 B1、琼脂粉等购自北京科百奥生物科技有限公司。

    1.1.3 主要仪器 SP-752 紫外可见光分光光度计购自上海光谱仪器有限公司；除菌滤器、微孔滤膜(孔径 0.22 μm，直径 13 mm)购自北京科百奥生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 麦芽糖琼脂培养基的配制 培养基由麦芽糖 20.0 g、K2HPO41.0 g、KH2PO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、琼脂粉 15.0 g、去离子水1000 ml 配制而成。培养基在高压灭菌前，将初始pH 调至 5.0。

    1.2.2 抗氧化剂的添加 将维生素 C(Vc)溶解于去离子水中，配制成 100 mg/ml 的母液，母液经0.22 μm 微孔滤膜过滤除菌后，将不同体积的 Vc母液分别加入到灭菌后冷却至 60 ℃ 左右的麦芽糖琼脂培养基中，使 Vc 在培养基中的终浓度分别为 0.5、1.0、2.0、5.0、10 和 15 mg/ml。将 NADPH氧化酶抑制剂 apocynin(Apo)溶解于去离子水中并以超声助溶 ......