赵晓丽，陈金晶，司书毅，陈琳峰，王真

    野黄芩苷体外促成骨分化作用研究

    赵晓丽*，陈金晶*，司书毅，陈琳峰，王真

    【摘要】

    目的研究野黄芩苷的体外促成骨分化作用。

    方法利用荧光素酶报告基因系统检测野黄芩苷对稳定转染 bmp2 启动子的 MC3T3-bmp2-Luc 细胞中 bmp2 转录活性的影响；体外培养小鼠颅骨来源的前体成骨细胞系MC3T3-E1 和小鼠多能间充质干细胞样成纤维细胞C3H10T1/2，采用 MTT 的方法检测野黄芩苷对细胞增殖的影响；p-NPP 法检测野黄芩苷对成骨细胞内碱性磷酸酶活性的影响以及通过茜素红染色的方法考察野黄芩苷对钙化结节形成的影响；Real-time PCR 进一步验证野黄芩苷长时间诱导后对成骨细胞 bmp2 mRNA 水平的影响。

    结果野黄芩苷可以在 20 μmol/L 显著上调 bmp2 转录活性(P

    图1 野黄芩苷结构式Figure 1 The structure of scutellarin

    1 材料与方法

    1.1材料

    稳定转染 bmp2 启动子的 MC3T3-bmp2-Luc细胞由司书毅教授课题组提供；Luciferase assay system 荧光素酶检测试剂盒购自美国 Promega 公司。野黄芩苷购自南京泽朗医药科技有限公司；β-甘油磷酸、L-抗坏血酸、地塞米松、p-NPP (P4744)、二乙醇胺(D8885)、茜素红均购自Sigma-Aldrich 中国公司；四甲基噻唑蓝(MTT)粉末购自美国 Amresco 公司，溶于水配成 5 mg/ml的储备液；Trizol(15596-018)购自美国 Life Technologies 公司；BCA 蛋白浓度检测试剂盒购自美国 Thermo Scientific 公司；Fast start universalSYBR green master mix 购自瑞士 Roche 公司；5 × PimeScript RT master mix 购自日本 Takara 公司；引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。

    1.2方法

    1.2.1细胞培养及成骨分化的诱导C3H10T1/2 用 MEM 培养基，MC3T3-E1 用 α-MEM 培养基。各种培养基均加入 10%(v/v)胎牛血清、100 U/ml青霉素和 100 μg/ml 链霉素以制成完全培养液。细胞在含有 5% CO2的 37 ℃ 恒温箱中孵育培养。MC3T3-E1 细胞的成骨诱导液配方：完全培养液 ......