王丹，冯文凯，林东方，郭晓茹，王雪蕾，苗庆芳，夏桂民

    米铂属于第三代铂类抗肿瘤药物，疗效确切[1-2]，但目前仅有米铂混悬注射液上市，且只能通过肝动脉栓塞给药用于肝癌的介入性治疗，限制了米铂的临床应用[3]。为促进米铂纳米制剂的发展，在米铂脂质体的基础上[4]，本课题组又成功构建了米铂白蛋白结合型纳米制剂(简称“米铂白蛋白”，HSA-miriplatin)，期望进一步拓展米铂的临床适应证。

    准确、快速地测定纳米制剂中主药的含量是开展后续研究的前提。高效液相色谱(HPLC)是测定纳米制剂中药物含量的常用方法，由于米铂分子中含有重金属元素铂，也可以采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)进行含量测定。但是 ICP-MS法仅能测得总铂的含量，却无法区分米铂与含铂的降解产物等杂质，而且 ICP-MS 法测试成本较高，因此探索使用 HPLC 法测定纳米制剂中米铂的含量。

    在进行含量测定之前，需要开展除蛋白等大分子的样品前处理工作，以便将米铂从结合型纳米制剂中高效提取出来。米铂白蛋白与米铂脂质体的样品前处理方法有着本质的不同。米铂脂质体是将米铂物理包裹在磷脂双分子形成的疏水双层膜中，有机溶剂(如甲醇等)溶解磷脂分子后，米铂释放到介质中，完成破乳，顺利提取米铂，开展含量测定分析。米铂白蛋白是利用氢键或疏水作用力将疏水性药物米铂镶嵌在白蛋白内部疏水腔中[5-7]。去除蛋白的常用方法是加入合适的有机溶剂使其变性，令蛋白以沉淀形式析出，再通过离心除去。所以，要在蛋白大分子析出之前释放出米铂，并使水中几乎不溶的米铂溶解在介质中，这是实现 HPLC 法分析检测的先决条件。因此，需要建立一个适合于米铂白蛋白的样品前处理方法。

    本研究建立了米铂白蛋白的样品前处理方法，并用 ICP-MS 法进行了对比验证；建立了简便、专属性强的 HPLC 方法用于米铂白蛋白中米铂的定量分析，并对该方法进行了系统的方法学验证。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    高效液相色谱仪(e2695 泵，SPD-M20A 检测器，CBM-20A 系统控制器，LabSolutions 工作站)购自美国 Waters 公司；辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)购自美国安捷伦科技有限公司；EmulsiFlex-C3 高压均质机购自加拿大 Avestin 公司；IKA T25 分散器购自德国 IKA公司；3-18KS 高速台式冷冻离心机购自美国 Sigma公司；R-300 旋转蒸发仪购自瑞士 Buchi 公司；XSE105 分析天平购自瑞士梅特勒公司；Nano-ZS纳米粒度电位仪购自英国 Malvern 公司 ......