贾坤，苏建荣

    组织切片中常采用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)对特定标志物的蛋白和基因水平进行检测，其对生物医学基础研究、预防临床医学的研究、军事医学的应用研究以及病理的辅助诊断等方面都具有重要意义[1-2]。免疫组织化学是指利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记在抗体上的显色物质(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来检测组织细胞抗原，对其进行定位、定性和定量检测的技术[1]。荧光原位杂交是依据碱基互补原理，应用荧光素直接或间接标记的核酸探针在复制切片、细胞涂片、染色体辅片上检测间期细胞核染色质数量即结构变化，进行定性和相对定量的分析检测技术[2]。采用免疫组织化学和荧光原位杂交两种方法分别在蛋白和基因水平对特定标志物的表达进行检测，从而为临床提供辅助的诊断信息。在大多数情况下两者的检测结果是一致的，即标志物基因和蛋白水平的表达存在明确的相关性[3]，然而在有些情况下，由于翻译后修饰和基因表达调控等原因，特定标志物基因和蛋白表达水平不完全一致，这种情况下就需要将两种方法联合起来进行检测[4-5]。常规的做法是在两张切片中分别进行 IHC 和 FISH的检测，首先在 IHC 染色片子上确定待复核的区域；然后在 FISH 标本上低倍镜下找到相同的组织细胞结构，采用高倍镜进一步的观察。该方法受切片质量、肿瘤异质性、染色过程等的影响[4-6]。

    本文建立了一种在同一张片子上同时对特定标志物进行蛋白和基因水平检测的方法，联合蛋白的 IHC 和基因的 FISH 检测方法，在同一张片子上进行同一种标志物蛋白水平和基因水平的检测，提高这两种方法的匹配度和适用性，可为临床提供更好的辅助诊断方法。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 人乳腺癌细胞系 JIMT-1 购自上海子实生物科技有限公司。

    1.1.2 主要试剂及仪器 兔抗人 HER2 单克隆抗体 ab214275、兔抗人 pan-CK 单克隆抗体ab234297、兔抗人 Ki67 单克隆抗体 ab92742、Alexa Fluor 488 标记山羊抗兔荧光二抗均购自Abcam 公司；抗兔二抗 SP 试剂盒、DAB 显色液购自北京中杉金桥公司；Alexa Fluor 555 标记的HER2 基因探针购自美国雅培公司；胎牛血清、RPMI1640 培养基、 胰蛋白酶均购自美国Sigma-Aldrich 公司；细胞培养箱购自美国 Napco公司；超净工作台购自北京冠鹤净化设备有限公司；原位杂交仪 Hydridizer 购自丹麦 Dako 公司；荧光显微镜 Nikon-Ni 购自日本尼康公司 ......