何维，杨雨欣，李怡宏，李晓茜，李星星，侍媛媛，孙红敏，王丽，解云英，洪斌

    ·论著·

    微生物来源的PCSK9转录抑制剂的发现及活性研究

    何维*，杨雨欣*，李怡宏，李晓茜，李星星，侍媛媛，孙红敏，王丽，解云英，洪斌

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室(何维、杨雨欣、李怡宏、李星星、侍媛媛、孙红敏、王丽、洪斌)，医科院药物合成生物学重点实验室(李怡宏、李晓茜、李星星、侍媛媛、孙红敏、解云英、洪斌)

    拟通过筛选寻找具有 PCSK9 表达抑制活性的菌株发酵液及其活性组分，通过对其活性进行初步研究，以期获得能够用于治疗或预防动脉粥样硬化的先导化合物或药物候选物。利用前期工作构建的 PCSK9 转录抑制剂高通量筛选模型对国家新药(微生物)筛选中心发酵液样品库进行筛选，对阳性发酵液进行分离提取以获得具有 PCSK9 表达抑制活性的小分子化合物，利用蛋白免疫印迹方法检测化合物对相关蛋白表达的影响，利用流式细胞术检测肝细胞摄取 LDL-C 情况的变化。获得阳性菌株 I03A-00300 及其活性组分杀粉蝶菌素 A1。杀粉蝶菌素 A1在低浓度时即可显著抑制 HepG2 细胞中 PCSK9 的表达，进而增加LDLR 的表达。还可以促进 LDLR 介导的肝细胞对 LDL-C 的摄取功能增加约一倍。杀粉蝶菌素 A1 作为 PCSK9 抑制剂，在细胞水平证实可上调 PCSK9 调控的下游基因 LDLR 的表达及其介导的 LDL 胆固醇的摄取作用，证明该化合物有望发展为新型抗动脉粥样硬化先导化合物。

    动脉粥样硬化； PCSK9； 高通量筛选； 低密度脂蛋白胆固醇； 杀粉蝶菌素 A1

    心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是全世界人类健康的主要威胁之一，其中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)是动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD)发展的重要危险因素之一[1]。因此，降低 LDL-C 的水平对于治疗心血管疾病具有重要意义。PCSK9 是 2003 年被发现并被证明为心血管疾病的第三个易感基因[2-3]，它可以通过调节肝脏 LDLR 的降解来调控 LDL-C 的水平，抑制 PCSK9 可以有效地降低 LDL-C 的水平[4-5]。目前已成功上市的 PCSK9 抑制剂是两种单克隆抗体，分别是 alirocumab(Praluent?)和 evolocumab(Repatha?) ......