孕酮对视网膜缺血再灌注损伤神经元凋亡的影响
内核,1材料与方法,1实验动物与分组,2试剂与仪器,3模型建立,4标本制作,5免疫组化法检测Bcl-2蛋白表达,6凋亡检测,7观察指标,8统计学方法,2结果,1视网膜组织学情况,2Bcl-2蛋白表达情况,3细胞凋亡情
雷晓溪 ,鄢秀菊 ,刘 苏 ,吴 君 ,王 莉1.广东省东莞市南城人民医院眼科,广东东莞 523071;2.重庆市第一人民医院视明眼科中心,重庆 400040;3.重庆医科大学附属第二医院眼科中心,重庆 400010
视神经损伤是眼科常见病理过程,主要病理改变是视网膜神经节细胞及内核层细胞凋亡。青光眼、血管栓塞、出血等可造成神经元缺血,改善缺血后,视力反而下降。因此,探索缺血再灌注后视力下降的机制和治疗方法,具有重要意义。孕酮在神经系统损伤后有一定的神经保护和促进神经再生作用,是有潜在治疗作用的神经甾体,但孕酮对视网膜神经元凋亡的影响少见报道。本研究应用视网膜缺血再灌注模型,观察孕酮对视网膜神经元凋亡的影响并探讨其机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
选择新西兰大白兔36只,由重庆医科大学实验动物中心提供,体重2.0~2.5 kg;随机分为正常组4只,孕酮组和对照组,各16只,孕酮组和对照组再依不同再灌注时间,各按造模后 12、24、48、72 h 分为四组,各组 4 只。
1.2 试剂与仪器
试剂:孕酮注射液、速眠新(长春军需大学兽医研究所提供),链霉卵白素—过氧化物酶(HistostainTM-SP)免疫组化试剂盒、TUNEL试剂盒(ROCHE公司提供),兔多抗Bcl-2 IgG(武汉Boster公司提供)。仪器:GD-8型多媒体彩色图像病理分析仪。
1.3 模型建立
采用常规饲养新西兰大白兔。对照组和孕酮组分别在缺血前24 h肌内注射4 ml/kg生理盐水和4 mg/kg孕酮,1%地卡因滴眼局部麻醉,并给予速眠新0.3 ml/kg耳缘静脉注射。麻醉成功后将大白兔置于兔架固定器上固定,将连接生理盐水瓶输液管的4号半针自大白兔角膜缘穿入前房固定,升高输液瓶至与眼球垂直距离150 cm处(14.63 kPa眼内压),使网膜血管断流,可见球结膜苍白外观,维持1 h,遂将输液瓶高度渐放低 ......
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