任 聪，孟宪生，包永瑞

    辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600

    体外筛选川芎治疗冠心病的有效成分的提取纯化工艺研究

    任 聪，孟宪生，包永瑞

    辽宁中医药大学药学院，辽宁大连 116600

    目的：通过体外筛选方法，优选川芎治疗冠心病的有效成分的提取纯化工艺。方法：培养原代乳鼠心肌细胞，利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)缺氧1 h复氧1 h，损伤心肌细胞制备心肌细胞缺氧-复氧损伤模型来模拟体内缺血再灌注损伤，通过体外筛选方法，优选出川芎治疗冠心病的有效成分的最佳提取和纯化工艺。结果：优选出川芎的最佳提取工艺为使用6倍量的水，提取2次，每次1 h；其纯化工艺为使用15 ml HPD-300树脂，取9 BV的0.5 g/ml的川芎提取液上样，以5 BV的50%醇洗脱。结论：通过体外筛选的提取纯化工艺可信度高，为开发研究心脑血管疾病的药物提供了依据。

    川芎；提取；纯化；原代乳鼠心肌细胞；冠心病；连二亚硫酸钠

    川芎是一种广泛应用于临床来治疗冠心病的常用中药，现代研究表明川芎具有清除氧自由基、钙拮抗、扩血管、抗血小板聚集和血栓形成等多种作用，本文通过原代乳鼠心肌细胞的培养，利用连二亚硫酸钠损伤心肌细胞来模拟体内缺血再灌注损伤，筛选出川芎治疗冠心病的有效成分及其最佳提取和纯化工艺。

    1 仪器与试药

    1.1 药品和试剂

    川芎(购于安国药材批发市场)，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为正品；四甲基偶氮唑酶(美国Difco公司)；胶原酶Ⅰ (美国GIBCO公司)；DMEM高糖和低糖培养液 (美国GIBCO公司出品)；连二亚硫酸钠(天津市化学试剂三厂)；其他试剂均为市售分析纯。

    1.2 动物

    新生SD乳鼠(1～3 d)，由辽宁中医药大学动物室中心提供，达到国家清洁级标准。

    1.3 主要仪器

    NUAIRETM US AUTOFLOW型CO2培养箱(德国NUAIRE公司)；AE31型倒置荧光相差显微镜 (Motic公司)；UNRISE酶标仪(瑞士TECAN公司)。

    2 方法与结果

    2.1 川芎提取条件的考察[1-5]

    2.1.1 提取溶剂的考察取川芎药材5份，每份25 g，分别加入6倍量的水、30%醇、50%醇、70%醇、90%醇提取，提取1 h，离心，浓缩，定容至50 ml，保存，备用。

    2.1.2 正交试验根据预实验及查阅相关文献，选择溶媒量、提取时间、提取次数三个因素 ......