王明勇 李 燕 宋淑敏 彭 强▲

    1.泸州医学院附属医院医学实验中心，四川泸州 646000；2.泸州医学院附属医院小儿外科，四川泸州 646000

    人脐血内皮祖细胞的体外培养

    王明勇1李 燕1宋淑敏2彭 强2▲

    1.泸州医学院附属医院医学实验中心，四川泸州 646000；2.泸州医学院附属医院小儿外科，四川泸州 646000

    目的 从人脐带血中分离内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)，建立人脐血内皮祖细胞体外培养的方法，为实现内皮祖细胞的移植及实验研究提供足量的细胞来源。 方法 采用密度梯度离心法分离人脐带血内皮祖细胞，在EGM-2培养基中培养，采用流式细胞仪、免疫组化和免疫荧光鉴定EPCs。 结果 脐带血单个核细胞在经EGM-2培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态；1周后既分化成EPCs，细胞免疫荧光CD133染色率在培养第7天为(67.2±2.12)%，免疫组化CD34染色率为(89.67±2.05)%，流式细胞仪鉴定该种细胞CD133与KDR的双阳性率达87.8%。可确定该细胞为EPSc。 结论 采用本培养方法可获得良好的内皮祖细胞用于实验研究。

    细胞培养技术；单个核细胞；人脐血；内皮祖细胞

    自1997年Asahara等[1]首次在成人外周血分离到循环内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)以来，此后又陆续在骨髓、脐带血和其他软体组织中发现EPCs[2]。内皮祖细胞是来源于骨髓、外周血及脐带血和其他软体组织在外周血中循环，并能增殖分化为成熟的内皮细胞的一类前体细胞[3]。从脐带血中分离获取EPCs进行体外培养，较从骨髓、外周血和其他软体组织获取EPCs的量更多，损伤和风险更小，虽然从外周血中分离EPCs也很方便，但其含量仅为从脐带血中分离EPCs量的十分之一[4-7]。本实验通过密度梯度离心得到单个核细胞后，通过添加一些细胞因子进行体外培养，从而诱导和促进EPCs的分化，以获得足够的EPCs用于实验研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    人淋巴细胞分离液(Ficoll-Hv-qapue，密度1.077 g/mL，天津市灏洋生物制品有限公司)；EGM-2培养基 (Lonza，美国)；胎牛血清(Hyclone，美国)；血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)均为美国Peprotech公司产品；纤维连接蛋白(FN ......