杨 峰 黄国祥 袁淑仪 庞 泓 王金林 龚时文

    广东省东莞市人民医院，广东东莞 523126

    目前原发性肝癌的治疗是以手术为主的综合治疗，但总的手术切除率仅有20%～30%，且术后2年复发率高达50%[1]，因此化疗依然是肝癌治疗重要的辅助手段。为提高传统化疗药物的疗效并减少其毒副作用，靶向给药日益成为治疗肝癌的有效方法，而单克隆抗体和载药纳米微粒则是当前研究的热点[2-4]。笔者在前期研究中选择生物相容性好、可生物降解的天然高分子材料海藻酸钠和阳离子瓜尔胶，利用聚电解质复合法制成具有良好缓释性能的载表阿霉素纳米微粒(E-ADM-NPs)[5]。 本研究将进一步探讨EADM-NPs与抗VEGFR2单克隆抗体的交联，并观察交联物(E-ADM-Ab-NPs)对荷人肝癌裸鼠模型的抗肿瘤作用，以期用于原发性肝癌的靶向治疗。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与动物

    海藻酸钠(温州东升试剂厂)；阳离子瓜尔胶(美国E-conomy公司)；盐酸表阿霉素(法玛西亚有限公司)；抗VEGFR2单克隆抗体(美国Biodesign公司)；碳化二亚胺(EDC)(美国 Pierce 公司)；人肝癌 Bel 7402 细胞株(由中科院上海细胞生物研究所提供)；三级BALB/c裸鼠(由中山大学医学动物实验中心提供)。

    1.2 E-ADM-Ab-NPs的制备及抗体活性的检测

    依据文献方法[5]，利用聚电解质复合法制备E-ADMNPs和未载药 NPs。 称取 10 mg E-ADM-NPs和 2 mg抗VEGFR2单抗溶于pH值7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)中，缓慢加入5 mg EDC，4℃条件下搅拌2 h而后静置过夜。将所得溶液离心后用蒸馏水洗涤3遍，冷冻干燥即可制得EADM-Ab-NPs。 依法制备未载药 Ab-NPs，参考文献[6]利用酶联免疫测定法(ELISA) 对E-ADM-Ab-NPs和未载药Ab-NPs中抗VEGFR2单抗的活性进行检测。

    1.3 荷人肝癌裸鼠模型的建立

    取对数生长期的人肝癌Bel 7402细胞，用含15%小牛血清的PRMI 1640培养液按1×107/mL的浓度配成细胞悬液供皮下接种。取一定数量4～6周龄的三级BALB/c裸鼠，分别于右侧肩胛部皮下种植0.1 mL细胞悬液，饲养2周后选择生长良好、皮下肿瘤直径0.5～0.7 cm的裸鼠用于肿瘤治疗试验，饲养6周后选择生长良好、皮下肿瘤直径约1.0～1.2 cm的裸鼠用于药物的组织分布试验 ......