刘 涛 唐 涛

    1.新疆维吾尔自治区中医医院博士后科研工作站，新疆乌鲁木齐 830000；2.中南大学湘雅医院中西医结合科，湖南长沙 830054

    中风已成为导致人类死亡的第三大致死性疾病[1]。传统中医对“中风”的认识可追溯到《黄帝内经》，明确定义“中风”见于《金匮要略》，初步分类见于《医学衷中参西录》。随着CT等技术的引入，现代中医临床已将中风分为缺血性中风(IS)与出血性中风(ICH)。然而，中医药在急性期中风时采用相同的治法取得较好的疗效[2-3]，而其共性物质基础研究未见报道。因此，运用基于相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)的定量蛋白质组学方法，研究IS和ICH模型大鼠整体蛋白质图谱，揭示急性期中风的共性物质基础及分子机制，为急性期中风治疗提供一定的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    清洁级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠40只，6～7周龄，180～200 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号：SCXK(湘)2013-0004]。所有动物寄养中南大学实验动物学部提供，采用“3只/笼”在标准实验室条件(50±10)%相对湿度，昼夜12 h循环，温度控制在22～25℃下进行分笼饲养，并自由进食、水。所有实验均得到中南大学动物伦理委员会的批准(201403164)。

    1.2 主要试剂与仪器

    Ⅶ型胶原酶(Sigma，批号C0773)，8-plex iTRAQ试剂盒(AB Sciex，货号：4381664)；立体定位仪(美国，Stoelting Co.，Chicago，IL)；高效液相色谱(日本，岛津，LC-20AD)；液相色谱(美国，Thermo Scientific，Ultimate 3000)；质谱仪(美国，Thermo Scientific，Q Exactive)。

    1.3 方法

    1.3.1 分组 40只SD大鼠采用随机数字表法进行分组：IS假手术(Sham1)组、IS模型(IS)组、ICH假手术(Sham2)组和ICH模型(ICH)组，每组10只。IS组和Sham1组自由饮食后，24 h后生理盐水灌注后取脑；ICH组和Sham2组在48 h后，生理盐水灌注后取脑。每组4只大鼠进行蛋白质组学研究，剩余每组6只进行蛋白验证。

    1.3.2 实验动物ICH及IS造模 ICH模型采用胶原酶来诱导的脑出血模型、IS大鼠模型采用线栓法制备缺血再灌注模型 ......