雷公藤甲素对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用
1材料与方法,1试剂与设备,2实验动物及分组,3动物模型的建立,4取材及标本制备,5HE染色观察三组视网膜改变,6TUNEL法染色观察RGCs凋亡情况,7免疫荧光法观察存活RGCs,8免疫组化检测三组视网膜
汪新芳 马 滕山东省枣庄市中医医院 北京中医药大学枣庄医院眼科,山东枣庄 277000
青光眼是一种因视神经退行性病变所致视功能 损害的疾病,其发病机制至今不明,其主要特征为急性高眼压[1-3]。视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡与坏死是导致青光眼视神经损害的主要原因,保护青光眼视神经的关键环节是保护RGCs[4-5]。雷公藤甲素是从我国传统中药雷公藤中提取的主要有效成分之一,其主要药理活性为抗炎和免疫抑制[6-7]。文献报道[8],雷公藤甲素能够抑制中枢神经系统小胶质细胞活化,但其用于急性青光眼的有关报道目前较为少见。因此本研究建立急性高眼压大鼠模型,采用雷公藤甲素干预后观察实验动物的RGCs 情况,探讨雷公藤甲素治疗青光眼的潜在可能性。
1 材料与方法
1.1 试剂与设备
雷公藤甲素(中国药品生物制品检定所);TUNEL原位凋亡试剂盒(瑞士罗氏公司,批号:116848);免疫荧光染色试剂盒(北京爱必信公司,批号:abs50013);兔抗大鼠Caspase-3 抗体(美国Bioworld 公司,批号:CJ44121);XDS-1B 型倒置显微镜(重庆光学仪器厂);石蜡组织切片机(德国LEICA 公司,RM2235);图像采集系统(德国莱卡公司,DM5500 B)。
1.2 实验动物及分组
健康清洁级成年Wister 大鼠60 只,雌雄各半,体重(200±20)g,购自北京华阜康生物科技股份有限公司,动物许可证号SCXK(京)2017-0016。实验动物适应性饲养7 d 后,进行正式实验。本实验经北京中医药大学实验动物伦理委员会批准。
采用随机数字表法将60 只大鼠分为对照组、模型组、雷公藤甲素组,每组20 只。对照组不做任何处理,模型组和雷公藤甲素组大鼠右眼均制备急性高眼压模型 ......
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