杨慧芬 毛娟娟

    1.浙江省杭州市中医院乳腺科，浙江杭州 310007；2.浙江省宁波市中医院外二科，浙江宁波 315012

    乳腺癌全球新发病例已超肺癌位居首位，严重危害女性身心健康[1]。三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2 均呈阴性的乳腺癌，生存率低，恶性程度高，易复发转移，且无理想治疗靶点[2]。顺铂(Cisplatin，CDDP)是治疗TNBC 的有效手段之一，但易产生耐药性影响化疗效果[3]。因此逆转CDDP 的耐药性对治疗TNBC 具有重要意义。

    缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)可介导肿瘤细胞适应缺氧微环境，并参与肿瘤细胞的耐药形成[4-5]。二至丸合桂枝汤可降低MDAMB-231 细胞中HIF-1α 蛋白表达，并抑制细胞生长。由此，二至丸合桂枝汤可能通过调控细胞HIF-1α 的表达参与TNBC 细胞CDDP 耐受机制。首先制备CDDP 耐药细胞株(MDA-MB-231/CDDP)，并给予二至丸合桂枝汤和CDDP 干预，探讨二至丸合桂枝汤对MDA-MB-231/CDDP 细胞株的CDDP 的耐受及机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    20 只SPF 级SD 大鼠，体重(200±30)g，购于上海斯莱克动物实验有限公司[SCXK(沪)2017-0015]，在标准环境下[温度(23±2)℃，湿度为55%～70%，12 h光/暗循环]饲养于杭州鹰旸生物科技有限公司动物中心[(浙)2020-0024)]，自由饮食饮水。所有动物实验均参照实验动物保护和使用的指南[6]，并经杭州鹰旸生物科技有限公司伦理委员会批准。

    1.2 实验材料与仪器

    人乳腺癌细胞MDA-MB-231(货号：iCell-h133)购于赛百慷(上海)生物技术股份有限公司。二至丸合桂枝汤方剂(炙甘草6 g，桂枝、芍药、生姜各9 g，女贞子、旱莲草各10 g，大枣12 枚，水煎，浓缩至1 g/ml，置于4℃冰箱保存备用)。HIF-1α(1∶500，AF1009)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)(1∶500，AF5131)、GAPDH(1∶3000，AF7021)抗体购于Affinity。CCK8 试剂盒(货号：HY-K0301)购于MCE；MTT 试剂盒(货号：E606334-0500)购于BBI Life Sciences；细胞凋亡试剂盒(货号：556547)购于BD ......