郭杨燕 孙行云 孟繁兴 王 乐 李楠楠

    北京中医药大学东方医院脑病一科，北京 100078

    脑梗死是指由于多种原因引起脑细胞缺血缺氧性病变坏死，同时产生相对应的神经功能缺损症的疾病，约占脑血管疾病的70%[1]，是中国居民十大死亡原因之首[2-3]。《中国脑梗死中西医结合诊治指南2017》[4]推荐中西医综合治疗脑梗死。中医治疗脑梗死多以活血通络为主，以三七类活血化瘀药为代表的血塞通在临床应用广泛。有研究显示，血塞通可上调患者脑梗死后血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)通路信号的表达[5]，但其作用机制还有待进一步研究。可溶性Fms 样酪氨酸激酶1(soluble FMS-like tyrosine kinase 1，sFlt-1)可与VEGF高亲和力结合，抑制VEGF通路信号的表达，具有抗新血管生成作用[6]。sFlt-1 与VEGF、VEGFR-2 相互制约，共同维持血管正常生理功能。本研究拟建立小鼠脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)模型，探究血塞通注射液对OGD/R损伤小鼠脑微血管内皮细胞中VEGF、VEGFR-2 和sFlt-1 蛋白表达的影响，探究其对VEGF通路表达的影响及其可能的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞 小鼠脑微血管内皮细胞系(bEnd.3)(武汉普诺赛生命科技有限公司)。

    1.1.2 实验药物 血塞通注射液(云南白药集团股份有限公司，批号：20170913，规格：2 ml∶100 mg/支)。

    1.1.3 主要试剂及器材 β-actin(Proteintech)；羊抗鼠-HRP(Abmart，货号：M21001L)；羊抗兔-HRP(上海华安，货号：HA1001)；蛋白marker(北京全氏金生物技术有限公司，货号：DM111)；VEGFA Mouse(abclonal，货号：A17877)、VEGF Receptor 2(abclonal，货号：A5609)；soluble VEGF Receptor 1(Invitorgen，货号：36-1100)；缺氧培养装置(MIC-101，Billups-Rothenberg)；酶标仪(ELX800，Bio-Teck)；电泳仪(EPS300 ......