肾茶提取物抑制小鼠草酸钙结石作用研究
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【摘要】 目的 研究肾茶提取物的抗结石作用。方法 小鼠饲饮含乙二醇和氯化铵的水建立草酸钙肾结石模型，测定肾脏、尿液中草酸和钙的含量。肾脏病理切片观察，进行草酸钙结晶的评分。结果 肾茶提取物能明显降低肾结石小鼠尿液及肾组织中草酸和钙含量,减少草酸钙结晶在肾组织中的沉积。结论 实验结果提示，肾茶提取物可能通过降低尿液草酸钙浓度，抑制结晶在肾脏的沉积而发挥作用。
【关键词】肾茶；肾结石；草酸钙；乙二醇
The effects of orthosiphon extract on inhibiting renal calculus in mice
CAI Hua-fang,LUO Yan-xi,JIANG You-fang,et al.Institute of Materia Medica,Zhejiang Academy of Medical Sciences,Hangzhou 310013,China
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【Abstract】 Objective To study the effects of orthosiphon extract on inhibiting renal calculus.Methods The mice were fed ethylene alcohol and ammonium chlorideto cause renal calculus.The concentrations of calcium and oxalate acid in urine and kidney were determined in mice of kidney stone.The renal sections were observed to score calcium oxalate crystallization.Results Orthosiphon extract groups demonstrated obvious decrease concentration of oxalic acid and calcium in urine and kidney,and reduce calcium oxalate deposition in kidney.Conclusion The results suggest the effect of orthosiphon extract on inhibiting renal calculus in mice.
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【Key words】Orthosiphon;Renal calculus；Calcium oxalate;Ethylene alcohol
肾结石是泌尿系统常见疾病，发病率为3.4%～4.8%，发病率随年龄增加，危险性也增大。肾结石成分以草酸钙和磷酸钙结石为主，占全部尿路结石的80%～84%，其中草酸钙结石占58.8%。目前肾结石治疗主要运用体外冲击波碎石术(ESWL)和腔内泌尿外科手术，但难以根治肾结石，其术后复发率为78%～80%。我国在应用中医药治疗和预防结石病复发方面有着悠久的历史，但该方面的基础研究尚有待进一步深入。
肾茶(Orthosiphon，猫须草)为唇形科肾茶属植物，民间常用于急、慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、咽炎及风湿性关节炎。近年来国内外对肾茶的化学成分及其生物活性研究逐步展开，其抗肿瘤、抗炎、利尿和补肾作用的主要成分初步阐明。肾茶的抗结石作用临床应用证明其对泌尿系统感染、治疗尿路结石有较好疗效[1,2]，本实验通过肾茶提取物的小鼠草酸钙模型实验，探讨肾茶抑制结石形成的作用机理。
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1 实验材料与方法
1.1 动物 ICR小鼠，雄性，体质量29～34 g，实验动物质量合格证号码：SCXK(浙)2003-0001，由浙江省实验动物中心提供。
1.2 药物 肾A:为肾茶提取物黄酮组分A;肾B：为肾茶乙醇提取物黄酮组分B;肾C：为肾茶水提多糖组分;排石颗粒：20 g/袋，南京同仁堂药业有限责任公司，040943。
1.3 小鼠草酸钙肾结石模型 ICR小鼠，雄性，体质量29～34 g,随机分为12组。 除对照组小鼠每天饮用正常水外，其他各组均饮用成石水(1%的乙二醇+1%氯化铵)，连续饮用6周，同时各组按下述剂量灌胃给药。①对照组，等体积水;②模型组，等体积水；③排石颗粒组,6 g/kg；④肾A大剂量组,160 mg/kg;⑤肾A中剂量组,80 mg/kg;⑥肾A小剂量组,40 mg/kg;⑦肾B大剂量组,160 mg/kg;⑧肾B中剂量组,80 mg/kg;⑨肾B小剂量组,40 mg/kg;⑩肾C大剂量组,160 mg/kg;(11)肾C中剂量组,80 mg/kg;(12)肾C小剂量组,40 mg/kg。于实验第6周末次给药后，收集4 h尿液测定尿钙(甲基百里酚蓝法)、草酸(高锰酸钾退色法)含量。第6周末次给药后24 h处死全部小鼠，取肾脏称重，一侧肾用10%甲醛固定，常规切片，HE染色进行组织病理学观察；另一侧肾称重后，用生理盐水进行组织匀浆，测定肾钙、草酸含量。
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组织病理学观察肾脏结石评分标准：0分：无结晶；1分：局部或散在少到多量沙状结晶；2分：局部有单个细小结晶；3分：局部有多量细小结晶或有1个大颗粒单晶；4分：仅有3～4个大颗粒单晶散在或多量细小结晶；5分：局部有3～4处多量大结石积集成堆；6分：满视野多量大结石积集成堆。
1.4 统计分析 实验数据以均数±标准差(x±s)表示。经t检验，P
2.1 一般情况 小鼠造模后，精神萎靡，畏寒卷缩，毛色变黄，呈耸毛状，体质量增长明显抑制，肾脏/体质量比增加，部分动物死亡。而肾茶提取物各组与模型组相比，症状有所改善,但对肾脏重量/比无明显影响，结果见表1。
2.2 肾茶提取物对肾结石小鼠尿液、肾脏的钙和草酸含量的影响 肾提取物各组的尿液和肾脏钙、草酸含量明显低于模型组，结果见表2。
2.3 肾组织形态学和肾组织草酸钙结晶观察 肾脏组织肉眼观察：模型组动物肾脏水肿，表面苍白，质地变硬，肾脏表面可见散在白色小点。而阳性组与肾茶提取物各组症状较轻，表面红润，质地正常。
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病理切片组织学观察：模型组动物肾脏病变程度较严重，肾皮质部、髓部、肾盏、肾盂内存在大量草酸钙结石，严重者多量大结石积集成堆或满视野多量大结石积集成堆。与模型组比较，阳性组和肾茶提取物各组肾组织病变程度较轻，肾组织草酸钙结石评分较低，结果见表3。
3 讨论
目前已从肾茶中分离出黄酮类、酚酸类、琥珀酸、苯甲酸和乳酸[3]、α-香树脂醇、β-谷甾醇、胡萝卜苷、熊果酸[4]等化合物。早期研究认为其利尿作用是治疗结石病的基础，肾茶水提所得肌醇有利尿作用[5]，肾茶的利尿作用，伴有使尿碱化作用以及尿酸排泄量增加而促使其排石。
肾结石的形成是肾内一定大小的晶体潴留或粘附到肾小管上皮细胞，草酸钙晶体(CaOX)是肾结石中最常见的晶体。乙二醇是草酸的前体，进入体内后转化成羟乙酸，后者既可在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化为草酸，也可经乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸，乙醛酸又可以直接在非酶作用下转化为草酸。因此，给动物喂食乙二醇进入体内代谢后最终转化为草酸，经尿排出，增加尿中草酸的浓度，加服氯化铵，肾内结石形成率提高[6]。本实验观察发现肾茶提取物能明显降低肾结石小鼠尿液及肾组织中草酸和钙含量，这与肾组织病理切片观察到的结果是一致的。其抑制结石的形成可能是通过抑制草酸钙结晶的生长和聚集，减少草酸钙晶体在肾中的形成和沉积从而抑制草酸钙结石的形成，其确切机理探讨尚需进一步深入。
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参考文献
1 Premgamone A,Sriboonlue P,Disatapornjaroen W,et al.A long-term study on the efficacy of a herbal plant,Orthosiphon grandiflorus,and sodium potassium citrate in renal calculi treatment.Southeast Asian J Trop Med Public Health,2001,32(3):654-660.
2 黄荣桂.肾茶治疗血尿的临床研究.中国综合医学,1994,2：288-289.
3 斯建勇，李国清，郭剑，等.肾茶水溶性成分的研究.中草药,1996,27(1)：393- 394.
4 钟纪育，邬宗实.肾茶的化学成分.云南植物研究,1984,6(3)：344-345.
5 Fujimoto T,Tsuda Y.Isolation of myo-inositol from Kumis Kutjing.Yakugaku Zasshi,1972,92(8):1060-1061.
6 钟玲,熊爱华,杨延秀，等.乙二醇法复制肾结石模型给药途径和方法的比较.中国病理生理杂志，2000,4:381-382., 百拇医药(蔡华芳 罗砚曦 蒋幼芳 钟宇森)