ACE多态性与原发性高血压合并冠心病相关性研究(1)
【摘要】 目的 评估血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与原发性高血压合并冠心病的关系。方法 选择高血压组64例，冠心病组81例，原发性高血压合并冠心病组92例，健康对照组122例，采用聚合酶链反应技术检测ACE基因多态性,并比较其基因型及等位基因频率。结果 高血压与冠心病组ACE基因多态性分别与对照组比较均无统计学差异，原发性高血压合并冠心病组ACE基因型频率与对照组比较有统计学差异, ACE基因多态性与原发性高血压合并冠心病相关，P140 mm Hg和(或)舒张压>90 mm Hg，两者有一项经核实即确诊。排除继发性高血压、冠心病、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者等疾病。
1.1.3 冠心病组82例，男43例，女41例，年龄(58.69±13.70)岁，诊断标准为:临床确诊的心肌梗死或有心绞痛症状者，经冠状动脉造影显示至少有1支冠状动脉管腔狭窄>50%，排除高血压、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者等疾病。
1.1.4 原发性高血压合并冠心病组92例，男50例，女42例，年龄(60.23±12.82)岁，同时符合上述冠心病和原发性高血压的诊断标准。
, 百拇医药
1.1.5 对照组和其他各组相比,年龄和性别构成差异均无统计学差异(P>0.05)。
1.2 研究方法
1.2.1 血液样本的采集 从受检者肘前静脉抽血5ml置于EDTA化试管，用于聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR ) 检测ACE 基因多态性。
1.2.2 ACE基因多态性测定 试剂盒由中国医学科学院基础医学研究所提供。取外周静脉血5ml置于EDTA抗凝管中,低渗法分离白细胞,用常规盐析法提取DNA,溶于TE溶液中,用PCR扩增ACE基因第16内含子目的片段。引物:正向5'CTGGAGACC ACT CCC ATC CTT TCT3',反向5'GAT GTG GCC ATC ACA TTC CTC AGA T3'。PCR程序:94℃预变120 s, 94℃变性60 s,58℃退火120 s,72℃延伸90 s,30个循环后,再于72℃延伸300 s终止扩增。扩增产物加样于2%琼脂糖凝胶板上,溴化乙啶染色, 在100 V电压下电泳20 min, 紫外灯下观察结果。
, http://www.100md.com
1. 3 统计学方法 采用SAS8.1软件包作统计学处理, 根据资料要求采用基因计数法计算各组病例及对照组的基因型和等位基因频率；组间均数比较采用t检验，组间频数分布比较采用χ2检验， P
2.2 对照组及其他各组的基因型频率适合度检测,显示皆达到Hardy-Weinberg平衡。
2.3 ACE的D/I多态性基因型和等位基因在各组之间分布(见表1)。
2.3.1 高血压组与对照组基因型比较，P=0.068 8>0.05，差异无统计学意义。等位基因之间比较，P=0.296 1>0.05，均表明高血压组的ACE的D/I多态性与对照组无差异。
2.3.2 冠心病组与对照组基因型比较，P=0.236 7>0.05，差异无统计学意义。等位基因之间比较，P=0.100 6>0.05，均表明冠心病组的ACE的D/I多态性与对照组无差异。
, 百拇医药
2.3.3 高血压合并冠心病组与对照组基因型比较，P=0.000 1
3 讨论
ACE通过生成血管紧张素Ⅱ ( Ang Ⅱ)和灭活缓激肽而促进血管收缩，刺激心肌和血管平滑肌增生, 从而使血压升高,并且增加心脏后负荷；Ang Ⅱ的增高还可使内皮功能失调，诱发心肌缺血及粥样斑块破裂，也可使低密度脂蛋白在血管壁滞留、氧化及被吞噬细胞吞噬，从而导致冠心病。
ACE基因位于染色体17q23上,在其16内含子因存在或丢失287 bp的DNA片断而有插入/缺失多态性, 即ACE的D/I多态性；此外血清ACE活性高低在不同ACE基因型人群中依次为DD>DⅠ>Ⅱ型[1]。在ACE的D/I多态性与冠心病以及高血压的关系中,国内外做了大量的研究, 结果却不尽相同。
3.1 不少研究发现ACE基因缺失(D)型能增加冠心病的危险 Samani等[1] 分析了14个对白种人和日本人的相关研究，结果支持DD基因型增加心肌梗死的危险性。但也有研究持相反意见,Jeunemaitre[2]报道463例冠脉造影证实的高加索冠心病患者(156例有心肌梗死病史和307例无心肌梗死病史)ACE I/D基因多态性与心肌梗死和非心肌梗死无关,亦未发现与冠脉病变的严重程度相关；因此有人提出尽管他们的研究样本含量有限, 可能还不能得出ACE I/D 多态性与CAD 不相关的肯定结论, 但认为起码不能推荐常规检测ACEI/D 多态性作为决定心血管危险的因子。
3.2 ACE基因I/D多态性与EH 的关系争议也较大, 有人认为有关, 有人认为无关, 或者关系微弱, 或者认为有性别差异。国内沈洪等[3]做的一项多区域性研究表明西藏地区、武汉地区以及福州地区的高血压患者其ACE的基因型频率分布有差异,且各地区高血压患者D等位基因频率均高于正常对照组。但Staessen等[4]荟萃分析了有关ACE基因I/D多态性与EH关系的23项病例对照研究及一个高血压家系研究,提示EH与ACE基因I/D多态性无相关。, 百拇医药(梁日明 杨希立)
1.1.3 冠心病组82例，男43例，女41例，年龄(58.69±13.70)岁，诊断标准为:临床确诊的心肌梗死或有心绞痛症状者，经冠状动脉造影显示至少有1支冠状动脉管腔狭窄>50%，排除高血压、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者等疾病。
1.1.4 原发性高血压合并冠心病组92例，男50例，女42例，年龄(60.23±12.82)岁，同时符合上述冠心病和原发性高血压的诊断标准。
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1.1.5 对照组和其他各组相比,年龄和性别构成差异均无统计学差异(P>0.05)。
1.2 研究方法
1.2.1 血液样本的采集 从受检者肘前静脉抽血5ml置于EDTA化试管，用于聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR ) 检测ACE 基因多态性。
1.2.2 ACE基因多态性测定 试剂盒由中国医学科学院基础医学研究所提供。取外周静脉血5ml置于EDTA抗凝管中,低渗法分离白细胞,用常规盐析法提取DNA,溶于TE溶液中,用PCR扩增ACE基因第16内含子目的片段。引物:正向5'CTGGAGACC ACT CCC ATC CTT TCT3',反向5'GAT GTG GCC ATC ACA TTC CTC AGA T3'。PCR程序:94℃预变120 s, 94℃变性60 s,58℃退火120 s,72℃延伸90 s,30个循环后,再于72℃延伸300 s终止扩增。扩增产物加样于2%琼脂糖凝胶板上,溴化乙啶染色, 在100 V电压下电泳20 min, 紫外灯下观察结果。
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1. 3 统计学方法 采用SAS8.1软件包作统计学处理, 根据资料要求采用基因计数法计算各组病例及对照组的基因型和等位基因频率；组间均数比较采用t检验，组间频数分布比较采用χ2检验， P
2.2 对照组及其他各组的基因型频率适合度检测,显示皆达到Hardy-Weinberg平衡。
2.3 ACE的D/I多态性基因型和等位基因在各组之间分布(见表1)。
2.3.1 高血压组与对照组基因型比较，P=0.068 8>0.05，差异无统计学意义。等位基因之间比较，P=0.296 1>0.05，均表明高血压组的ACE的D/I多态性与对照组无差异。
2.3.2 冠心病组与对照组基因型比较，P=0.236 7>0.05，差异无统计学意义。等位基因之间比较，P=0.100 6>0.05，均表明冠心病组的ACE的D/I多态性与对照组无差异。
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2.3.3 高血压合并冠心病组与对照组基因型比较，P=0.000 1
3 讨论
ACE通过生成血管紧张素Ⅱ ( Ang Ⅱ)和灭活缓激肽而促进血管收缩，刺激心肌和血管平滑肌增生, 从而使血压升高,并且增加心脏后负荷；Ang Ⅱ的增高还可使内皮功能失调，诱发心肌缺血及粥样斑块破裂，也可使低密度脂蛋白在血管壁滞留、氧化及被吞噬细胞吞噬，从而导致冠心病。
ACE基因位于染色体17q23上,在其16内含子因存在或丢失287 bp的DNA片断而有插入/缺失多态性, 即ACE的D/I多态性；此外血清ACE活性高低在不同ACE基因型人群中依次为DD>DⅠ>Ⅱ型[1]。在ACE的D/I多态性与冠心病以及高血压的关系中,国内外做了大量的研究, 结果却不尽相同。
3.1 不少研究发现ACE基因缺失(D)型能增加冠心病的危险 Samani等[1] 分析了14个对白种人和日本人的相关研究，结果支持DD基因型增加心肌梗死的危险性。但也有研究持相反意见,Jeunemaitre[2]报道463例冠脉造影证实的高加索冠心病患者(156例有心肌梗死病史和307例无心肌梗死病史)ACE I/D基因多态性与心肌梗死和非心肌梗死无关,亦未发现与冠脉病变的严重程度相关；因此有人提出尽管他们的研究样本含量有限, 可能还不能得出ACE I/D 多态性与CAD 不相关的肯定结论, 但认为起码不能推荐常规检测ACEI/D 多态性作为决定心血管危险的因子。
3.2 ACE基因I/D多态性与EH 的关系争议也较大, 有人认为有关, 有人认为无关, 或者关系微弱, 或者认为有性别差异。国内沈洪等[3]做的一项多区域性研究表明西藏地区、武汉地区以及福州地区的高血压患者其ACE的基因型频率分布有差异,且各地区高血压患者D等位基因频率均高于正常对照组。但Staessen等[4]荟萃分析了有关ACE基因I/D多态性与EH关系的23项病例对照研究及一个高血压家系研究,提示EH与ACE基因I/D多态性无相关。, 百拇医药(梁日明 杨希立)